세포생물학실험 | SDS-Page

 

 

 

TIP

 

 

SDS-PAGE는 DNA를 전기영동으로 분리하여 크기를 알아보듯이 단백질도 SDS를 이용하여 전하는 모두 잃게 하고 크기에 의해 분리되게 만들어 전기영동을 통해 단백질의 크기를 알아본다.

 

 

 

Sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis (SDS-PAGE)는 단백질을 정제하는 동안 이를 monitor하고, 정제된 단백질의 동질성(homogeneity)을 알기 위한 가장 좋은 방법이다. SDS-PAGE는 일반적으로 단위체의 분자량을 결정하고, 정제된 단백질의 단위체 구성을 알기 위해 사용된다. SDS-PAGE는 더 깊은 연구를 위한 충분한 단백질을 얻기 위해 scale up될 수 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 각 lane 별로 30㎕ protein을 loading한다. (sample 16.4 dd H₂O 2X Sample buffer 16.4) 총 32.8

 

2) 100℃에서 5분동안 boiling한다.

 

3) Spin down 해서 Sample을 모운다. (살짝 원심분리)

 

4) Sample을 loading한다. (맨 왼쪽은 marker)

 

5) Run the gel at 50volts. (50-100V) 최소 30분

 

6) Gel을 분리하여 Coomassie blue stainning 염색시킨다.

 

7) Destainning하여 band를 확인한다.

 

 

 

[세포생물학실험]SDS-Page 레포트