일반생물학실험 | 형질 전환 - 박테리아 유전자

 

 

 

TIP

 

 

대장균의 형질 전환 실험을 통해 형질 전환의 원리와 개념을 이해한다.

 

 

 

형질 전환(Transformation)

유전물질인 DNA를 다른 계통의 살아 있는 세포에 주입했을 때, DNA가 그 세포에 들어가 유전형질(遺傳形質)을 변화시키는 현상. 형질 전환은 1928년 F. 그리피스의 폐렴균(肺炎菌)을 이용한 실험과 함께 알려졌다. 그리피스는 폐렴균 중에서 다당류(多糖類)로 이루어진 두꺼운 막(협막〈莢膜〉)을 갖는 병원성(病原性)의 세포(S형균이라 부른다)를 가열하여 죽인 다음, 같은 종의 균의 돌연변이체(突然變異體)로서 협막을 갖지 않는 비병원성 세포(R형균이라 부른다)와 섞어서 쥐에게 주사하여, 쥐는 발병(發病)해 죽고, 시체에는 열에 의해 죽었을 S형균이 출현하는 것을 발견하였다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Competent(DH5α)을 20㎕ 씩 멸균된 1.5㎖ tube에 분주한다. 이때 미리 plate를 37℃에서 incubate 해둔다.

 

2) DNA 1㎕(10㎕에 50ng 이하의 농도)를 각각의 tube에 첨가한다.

 

3) 잘 섞어준 뒤(tapping) 약 20～30분가량 ice에 방치한다. Cell 의 Transformation 효율 증진을 위해 항상 cool 한 상태를 유지

 

4) sample을 rack에 꼽은 뒤(Heating block Water bath) 42℃에서 90sec 동안 heat shock. 이때 튜브를 흔들면 안 됨

 

5) 90초가 지나면 sample을 빠르게 ice로 옮긴 후 약 3분간 방치한다.

 

6) 각각의 튜브에 200㎕의 SOC medium(LB를 사용하여도 무관) 첨가한다.

 

7) 준비된 용액을 고체배지에 분주한다.

 

8) spreader를 에탄올에 담그고 화염멸균한 후에 고체 배지(plate)위에 200㎕를 도말 한다.(도말평판법)

 

9) plate를 뒤집은 후 37℃에서 12～16시간동안 incubation 한다.

 

10) 고체 배지에 배양된 대장균을 확인한다.

 

 

 

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