미생물학실험 | 그람 염색 및 미생물 동정

 

 

 

TIP

 

 

그람염색에 의한 세균 감별염색방법과 염색의 원리를 익히고, 미생물의 그람양성 및 그람음성을 판별해 본다.

 

 

 

1884년 덴마크 의사 한스 크리스티안 그람이 고안한 특수 염색법의 하나로 세균의 세포벽의 구조 차이를 이용하여 분류하는 기초적 세균염색법의 일종이다. 세균의 염색 특징(양성 혹은 음성)에 의하여 세균의 분류 및 동정에 이용되는 염색법이라고 할 수 있으며, 염색한뒤 세포벽 구조의 차이에 의해 보라색으로 염색되는 세균을 그람양성균, 붉은색으로 염색되는 세균을 그람음성균이라고 분류 한다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 슬라이드글라스에 균명을 기입하고, 뒷면 중앙부에 펜으로 직경 5～10mm의 원을 그린다.

 

2) 슬라이드글라스 중앙부 원위에 증류수를 소량 떨어뜨린다.

 

3) 고체배지에서 18～24 시간동안 배양된 균을 백금루프(inoculating loop)로 살짝 떠서 슬라이드 글라스 위의 증류수에 잘 푼다.

 

4) 알코올램프의 불꽃 위를 수회 통과시키면서 Heat-fix(가열고정)한다.

 

5) Crystal violet 염색액(primary dye)을 떨어뜨리고 30초간 염색시킨다.

 

6) 5초간 증류수로 세척한다.

 

7) iodine용액(moordant)을 떨어드리고 1분간 반응시킨다.

 

8) 5초간 증류수로 세척한다.

 

9) Etanol을 10회정도 떨어뜨려 충분히 탈색시킨다. 슬라이드로부터 더 이상 보라색이 흘러나오지 않을 때 까지 실시

 

10) 5초간 증류수로 세척한다.

 

11) Safranin(counter stain)을 떨어뜨린 후 1분간 염색시킨다.

 

12) 5초간 증류수로 세척한다.

 

13) 흡수지를 반으로 접고, 그 사이에 슬라이드글라스를 넣고 살짝 눌러 물기를 제거한다.

 

14) 현미경으로 그람염색성을 관찰한다.(400X)

 

 

 

[미생물학실험]그람 염색 및 미생물 동정 레포트