일반생물학실험 | Gram Staining

 

 

 

세균의 염색 방법에는 4가지 방법이 있다. Simple staining, Gram staining, Spore staining, Capsule staining이 있다. 세균의 단순한 모양과 크기만을 아는 게 아니라 그 세균이 Gram positive인지 Gram negative인지를 알 수 있는 방법인 Gram staining을 실험에 사용했다.

 

Gram staining은 1884년 덴마크의 미생물학자인 Christian gram에 의해서 고안된 Differential staining으로 세균은 두 그룹으로 나눠 준다. 염색 과정을 거쳐서 나오는 균들의 색깔을 보고 Gram positive, Gram negative 이 두 가지로 나눠 주는 것이 Gram staining 이다.

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실험 방법

1. Gram staining

1) 백금이로 균을 추출해서 슬라이드 글라스에 펴 바른다.

 

2) 균을 고정시키고 건조시키기 위해 불 위에 두, 세 번 왔다 갔다 한다.

 

3) 슬라이드 글라스가 다 마르면 crystal violet을 떨어뜨려 1분간 방치시킫다.

 

4) 1분이 지나면 슬라이드 글라스를 거꾸로 뒤집어 물로 간접적으로 씻어낸다.

 

5) 그다음으로 Gram iodine(Lugal sol)을 떨어뜨려 착색 시킨다. 이때 1분간 방치한다.

 

6) 1분이 지나면 물로 간접적으로 씻어낸다.

 

7) 탈색을 하기 위해 95% ethyl alcohol을 떨어뜨린다. 그러고 5～10초 방치 시킨다.

 

8) 시간이 지나면 물로 간접적으로 씻어낸다.

 

9) 마지막 2차 염색을 위해 슬라이드 글라스 위에 safarin을 떨어뜨린다. 그러 고 나서 1분간 방치한다.

 

10) 1분 뒤, 물로 헹궈내는데 이때 헹구는 시간이 30초를 넘지 않아야 한다.

 

11) 씻어 낸 뒤 슬라이드 글라스가 마를 때 까지 기다린다.

 

2. 현미경으로 관찰하기

1) 마른 슬라이드 글라스를 현미경으로 관찰한다.

 

2) Staphylococcus aureus 이면 둥근 모양, E. coli 이면 길쭉한 모양이다.

 

3) 보라색이 관찰되면 Gram positive이고 붉은색이나 분홍색이 관찰되면 Gram negative이다.

 

 

 

[일반생물학실험]Gram Staining 레포트