일반생물학실험 | Gram Staining

 

 

 

그람 염색법은 1884년 Hans Christian Gram에 의해서 처음으로 개발된 방법으로 각종 검체 및 배양집락의 현미경적 검사에 이용되며 미생물에 의한 감염여부를 조기에 진단할 수 있게 해준다. 이 실험은 그램 염색을 통해서 세포벽의 두꺼운 정도를 알 수 있고 또한 이 실험 방법은 박테리아 분류의 한 방법이기도 하다. 미생물은 다양한 방법으로 분류된다. 즉, 미생물의 형태나 모양에 따라 분류하기도 하지만 미생물이 생존할 수 있는 온도, 수소이온농도(pH), 수분활성도 범위에 따라 분류하기도 한다.

 

또 미생물은 이용하는 에너지원, 산소의 존재유무, 포자생성방법, 그리고 염색에 의해서도 분류하며, 이러한 분류는 특정목적에 맞게 임의적으로 사용된다. 이번 실험을 통해 Gram staining의 원리에 대해서 알아보고 실험을 통해 그램 양성균(Gram-negative bacteria)과 그램 양성균(Gram-positive bacteria)으로 구분을 해본다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 깨끗한 slide glass 위에 물 한 방울을 떨어뜨린다.

 

2) 배양관 뚜껑을 열고 loop로 culture를 문지른다.

 

3) bacterial colony를 원을 그리듯이 문질러 slide에 퍼지도록 한다.

 

4) 세균이 슬라이드 글라스 위에 고정되는 것을 돕기 위해 물이 완전히 제거되도록 슬라이드를 Bunsen burner로 가열시켜준다. 이때 열에 의해 slide가 깨지지 않도록 주의한다.

 

5) crystal violet으로 준비된 표본을 약 60초간 염색한다.

 

6) 염색된 미생물을 증류수로 헹구어주고 마를 때까지 기다린다.

 

7) iodine을 crystal violet로 1차 염색된 표본에 흘리며 염색을 고정시킨다.

 

8) 증류수로 깨끗이 헹구어주고 완전히 마를 때까지 기다린다.

 

9) Decolorizer를 충분히 흘려주어 염색된 표본을 탈색한다. 이때 Decolorizer가 슬라이드 위에서 완전히 제거될 수 있도록 슬라이드를 기울여준다.

 

10) Safranin으로 1차염색 및 탈색과정을 거친 표본을 2차 염색한다.

 

11) 증류수로 깨끗이 헹구어주고 완전히 마를 때까지 기다린다.

 

12) gram positive bacteria와 gram negative bacteria의 색깔변화 관찰한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Gram Staining 레포트