일반생물학실험 | 그람 염색

 

 

 

TIP

 

 

순수배양한 미생물을 동정하기 위해 그람염색을 한다. 양성·음성균은 화학요법제에 대한 감수성뿐만 아니라 균의 증식에 필요한 영양소의 종류, 물리·화학적 자극에 대한 반응, 생산하는 독소, 병변 등 각 방면에서 차이가 있기 때문에, 양성·음성을 구분해 순수배양한 미생물을 이용할 때 필요한 정보를 알 수 있다.

 

 

 

그람 염색

1884년 덴마크의 의사 Gram이 고안한 특수 염색법으로, 표본을 크리스탈 바이올렛으로 물들여서 아이오딘·아이오딘화 칼륨액으로 처리한 후, 순에탄올로 씻으면, 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색으로 보인다. 그러나 그 후 여러 가지 균종이 발견되자 그 속에는 조직과 마찬가지로 에탄올 세정에 의하여 탈색되는 균도 있다는 것이 밝혀졌다. 이때 탈색되는 균을 그람음성균, 탈색되지 않는 균을 그람양성균이라 부르기로 하면서 이 염색법은 당초의 목표와는 달리 세균의 분류에 이용되기도 하였다. 그 후 양성·음성균은 화학요법제에 대한 감수성뿐만 아니라, 균의 증식에 필요한 영양소의 종류, 물리·화학적 자극에 대한 반응, 생산하는 독소, 병변 등 각 방면에서 차이가 있다는 것을 알게 되면서 그람염색법의 의의는 증대하였다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Slide glass에 균주 이름을 적고, D.W 한 방울씩을 떨어뜨린다.

 

2) 떨어뜨린 D.W 위에 일회용 백금이로 균주를 둥글게 펴주며 도말한다.

 

3) Slide glass위 D.W가 마를 때까지 기다린 후 알코올 램프로 건조(고정) 시킨다.

※ 알코올 램프로 너무 오래하면 균주가 산화될 수 있기 때문에 위에서 4~5번 정도 움직인다.

 

4) Crystal violet을 떨어뜨린 후 1분 간 기다린 후 수세한다.

※ 수세 시, D.W를 균주에 직접적으로 뿌리지 않고 위쪽에서 흘려보낸다.

 

5) Gram’s iodine을 매염(염색이 잘 되도록 도와줌)하고 1분을 기다린다. 이후에 수세한 후 95% Ethanol로 탈색한다.

 

 

6) Safranin으로 45초간 염색한 뒤 수세하고 cover glass를 덮는다.

 

 

 

[일반생물학실험]그람 염색 레포트