생명과학실험 | Gram Staining

 

 

 

TIP

 

 

1. 그람 염색의 화학적, 이론적 기초를 파악하고 그람 양성과 음성의 박테리아를 구분할 수 있다. 
2. 그람염색을 통해 미생물을 그람양성과 그람음성으로 분류한다. 그람염색을 통해 미생물을 분류할 수 있다.

 

 

 

그람염색법의 원리

그람 염색을 하기 위해선 관찰하고 싶은 세포에 염색액을 묻힌 후 요오드용액처리를 한다. 그 후 에탄올로 세포를 씻게 되면 조직은 탈색되지만 균은 탈색되지 않고 자주색(염색액의 색)으로 보이게 된다. 자주색으로 균이 보이게 되기 때문에 그람염색법을 이용하여 균을 관찰할 수 있었다. 하지만 에탄올 처리 과정에서 특정균의 경우에는 탈색되는 경우가 있다. 그래서 그람염색을 할 때 에탄올 처리 과정에서 탈색 되지 않는 세균을 그람 양성균이라 하고 탈색되는 균을 그람 음성균 이라고 한다.

728x90

 

 

실험 방법

1. Gram Staining

1) 균이 담긴 액체 배지를 slide glass에 한 방울 (10㎕) 떨어뜨린 후 공기 중에서 건조시킨다. 많이 떨어뜨리면 건조하는데 시간이 오래 걸리므로 조금만 떨어뜨려준다.

 

2) Slide glass를 알코올 램프 불꽃에 통과시켜 열로 고정시킨다.

 

3) Crystal violet으로 1분간 염색한다. (100-200㎕)

 

4) 물로 washing 해준 뒤 물기를 페이퍼 타월로 조심히 제거한다.

 

5) Gram iodine으로 1분간 처리한다. (100-200㎕)

 

6) 물로 washing 해준 뒤 물기를 페이퍼 타월로 조심히 제거한다.

 

7) Decolorizer로 10초간 탈색한다. 슬라이드 글라스를 경사지게 한 뒤 100㎕짜리 pipette을 이용하여 균 위로 decolorizer를 흘려보내준다. Decolorizer로 너무 오래 탈색할 시 gram-positive균도 탈색되기 때문에 주의한다.

 

8) 물로 washing 해준 뒤 물기를 페이퍼 타월로 조심히 제거한다.

 

9) Safranin으로 1분간 염색한다. (100-200㎕)

 

10) 물로 washing 해준 뒤 물기를 페이퍼 타월로 조심히 제거한다.

 

11) 공기 중에서 건조시킨다.

 

12) 광학현미경으로 관찰한다.

 

 

2. KOH Test

1) KOH 3%를 슬라이드 글라스에 3-4 방울 떨어뜨린다.

 

2) Loop를 이용하여 배양된 군집을 추출한다.

 

3) 준비된 KOH 3% 용액에 추출한 군집을 떨어뜨리고 이쑤시개로 2-5분 가량 섞어준다.

 

4) 섞어준 뒤 이쑤시개를 들어올려 점성이 있는지 확인한다.

 

5) 끈적한 점성의 용액이 loop와 함께 올라온다면 gram-negative이며, 점성이 보이지 않으면 gram-positive로 판단한다.

 

 

 

 

[생명과학실험]Gram Staining 레포트