미생물학실험 | 그람 염색법

 

 

 

TIP

 

 

분별염색 기법의 한 종류인 그람염색 방법을 익히고 그람염색 방법의 원리를 알 수 있다. 그람양성균과 그람음성균을 구분할 수 있다.

 

 

 

그람염색법은 미생물을 관찰하기 위해 사용하는 염색법이다. 그람염색은 미생물의 세포벽을 구성하는 특정구조와 화학반응을 일으켜 염색이 이루어지는데, 세포벽에 그람염색과 반응하는 화학구조를 갖는 미생물을 그람양성, 그렇지 못한 것을 그람음성으로 분류한다. 그람염색법을 통해 미생물을 분류할 수 있다.

 

그람염색(Gram staining)의 원리는 분별염색(differential staining)이다. 분별염색은 세균의 식별을 용이하게 하기 위하여 2가지 이상의 생물학적 염료(biological dye)를 사용하는 염색방법이다. 분별염색 기법은 특정 세포구조물을 염색하기 위해 사용될 수 있는데, 이 염색방법은 세포의 형태와 세포배열과 같은 특성의 관찰을 용이하게 하여 세포의 시각화를 증진시킬 뿐만 아니라 기타 특이한 정보도 제공한다. 대부분의 세균세포에서 염색결과는 Gram 양성(Gram-positive)이나 Gram 음성(Gram-negative)으로 나타난다. 세균을 crystal violet의 염료로 염색시킨 후 알코올이나 아세톤으로 탈색시켜 crystal violet이 색인 보라색이 탈색되면 Gram음성, 보라색이 남아있으면 Gram양성으로 정의한다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 슬라이드 글라스 위에 증류수 한 방울을 떨어틀이고, A균을 증류수와 함께 넓게 펼쳐서 도말한다.

 

2) crystal violet을 첨가하고, 1분～1분 30초 정도 염색 후, 증류수로 crystal violet을 닦아낸다.

 

3) Gram Idodine 용액으로 슬라이드를 덮은 후 1분～1분 30초 후에 증류수로 헹군다.

 

4) 45도 각도로 슬라이드를 잡고 약 10초간 acetone-alcohol로 헹구고, 더 이상의 탈색을 방지하기 위해서 즉시 증류수로 헹군다.

 

5) Safranin을 30초～1분 동안 슬라이드에 첨가한 후, 증류수로 헹군 다음 물기를 제거하여 말린다.

 

6) 1)～5)과정을 균 B, C, E도 반복한다.

 

7) 이쑤시개로 구강미생물을 긁어내어 1)～5) 과정을 반복한다.

 

 

 

[미생물학실험]그람 염색법 레포트