미생물학실험 | Gram-Stain

 

 

 

TIP

 

 

여러 미생물을 가지고 그람염색을 해본 후 그람음성도에 따라 분류 해 보자.

 

 

 

Gram-Stain

세균이나 효모를 동정하고 분류하는 염색 방법으로 1884년 덴마크의 의사 한스 크리스찬 그람이 고안했다. 세균은 그 고정 표본을 Crystal violet, gention violet으로 염색하고, lugol solution으로 처리 한 후 순 에틸 알코올로 탈색조작 하였을 때 탈색되지 않는 균군(gram양성균)과 탈색되는 균군(gram음성균)으로 구별된다. 계속하여 옅은 safaradine sol또는 fuchisin sol로 대비염색하면 전자는 그대로 자색, 후자는 후염색에 의해 적색으로 염색된다.

 

이것은 세포표면 특히, 세포벽의 화학구조의 차이에 의한 것이다. 그람양성균과 그람 음성균 사이에서 화학적, 생물학적 여러 가지 차이가 인정된다. 그람음성균의 세포벽은 양성균보다 지질함럄이 많고, peptidoglycan층이 엷다. 따라서 peptidoglycan층에 침투하는 crystal violet/요오드 복합체는 쉽게 추출되는 결과 탈색된다.

 

지질이 없고 peptidoglycan층이 두꺼운 그람 양성균에서는 alcohol에 의한 탈수로 세포벽이 더욱 치말하게 됨으로써, 투과성이 저하되어 crystal violet/요오드 복합체가 쉽게 탈색되지 않는다. 따라서 그람음성균은 항상 음성으로 염색되지만 그람양성균은 장기간 배양으로 세포벽이 변질 되거나, lysozyme으로 peptidoglycan층을 제거하면 음성으로 나타난다. 그람양성균의 종류에는 폐렴균·포도상구균·연쇄상구균·탄저균(炭疽菌)·나병균·디프테리아균·파상풍균 등이 있으며, 그람음성균의 종류에는 콜레라균·페스트균·티푸스균·이질균·대장균·임균·스피로헤타 등의 균종이 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 슬라인드 글라스에 각각의 샘플을 200㎖가량 도말한다

 

2) 30～1시간가량 건조하여 바싹 마르게한다. 우리 실험에서는 전기 히터를 이용하였다.

 

3) Crystal violet을 200㎖정도 넣고 1분간 가만히 둔다.

 

4) 증류수로 washing한후 다시 건조시킨다.

 

5) gram iodin을 400㎖정도 넣고 다시 1분간 둔후 씻어준다.

 

6) 에탄올을 200ml를 10초가량 넣어 탈색 시킨 후 다시 씻어준다.

 

7) 탈색된 샘플에 safarin을 넣고 다시 1분간 기다린 후 씻어준다.

 

8) 건조시킨후 완성된 샘플을 현미경으로 관찰 한다.

 

 

 

[미생물학실험]Gram-Stain 레포트