일반생물학실험 | 플라스미드 DNA 추출

 

 

 

TIP

 

 

Recombinant DNA plasmid가 들어있는 E.coli로부터 plasmid를 직접 추출하여 분자생물학적 실험의 기본이 되는 DNA관련 실험에 대해 이해한다.

 

 

 

외부 DNA를 E.coli에 도입시켜 형질전환이 이루어지게 하면 이 세포들은 기존에 갖고 있던 chromosomal DNA 뿐만 아니라 plasmid DNA도 갖고 있게 된다. 특정한 DNA를 확보하고 싶을 때, 그 plasmid DNA를 숙주세포에 도입한 후, 따로 분리해내면 원하는 것을 얻을 수 있다. 이 실험에서 Ampicillin이 포함된 LB배지에서 키운 형질전환된 Ampicillin 저항성 E.coli를 이용하여 특정한 plasmid DNA를 얻는다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) Ampicillin이 포함된 LB배지에서 키운 형질전환된 E.coli를 1㎖ 얻어 E-tube에 옮긴다.

 

2) 12,000rpm 30초간 원심분리하고 상층액을 버린다.

 

3) Resuspension buffer를 250㎕ 넣고 vortexing하여 pellet을 완전히 풀어준다.

 

4) Lysis buffer를 250㎕ 넣고 gently inverting 해준다.

 

5) 12,000rpm에서 10분간 원심분리한다.

 

6) Pellet이 딸려오지 않도록 상층액을 column에 옮긴다.

 

7) 12,000rpm에서 1분간 원심분리하고 collection tube에 있는 용액을 버린다.

 

8) Washing buffer A를 700㎕ 넣고 1분 원심분리한 후 collection tube의 용액을 버린다.

 

9) Washing buffer B를 700㎕ 넣고 1분 원심분리한 후 collection tube의 용액을 버린다.

 

10) Column을 E-tube에 옮긴 후 50㎕의 elution buffer를 넣은 후 1분간 incubation한다.

 

11) 12,000rpm에서 1분간 원심분리한다.

 

 

 

[일반생물학실험]플라스미드 DNA 추출 레포트