일반생물학실험 | 플라스미드 추출

 

 

 

플라스미드는 생장에 필수적인 염색체이며 DNA에서 물리적으로 분리 돼 있는 대표적인 에피솜 DNA분자라고 한다 1953년에 미국의 유전학자 레더버그가 처음으로 플라스미드를 세균의 염색체 말고 독자적으로 증식을 할 수 있는 DNA 분자라는 의미로 이름을 지었다고 한다. 쉽게 말하면 플라스미드는 세균에서 발견이 되는 염색에 이외에 DNA이고 고리모양의 이중가닥 DNA 모양으로 수천개에서 수만개의 염기쌍으로 이루어져 있다고 한다.

 

하나의 세포내에 여러 개 존재하고 염색체와는 독립적으로 복제가 된다는 게 특징이다. 또 생존에 필수적이지는 않지만 특정한 환경에서 생존을 하는데 유리한 유전자들이 존재한다. 또 세균에 존재하지만 효묘와 같은 진핵 생물에서도 발견이 된다고 한다. 플라스미드의 형태로는 원형 DNA의 한 가닥에 틈이 존재하는 원형모양인 열린 원형 모양 , DNA의 특정한 부위에서 두 가닥이 절단된 선형 모양, 원형의 DNA가닥이 꼬여서 뭉친 초나선형 모양이 있다고 한다. 플라스미드의 활용방법은 여러가지가 있는데 유전자 클로닝, 유전자 전달, 외래 유전자 또는 재조합 유전자 발현, 유용 단백질 생산, 백신 상산 등으로 활용 가능하다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 적절한 항생제가 포함된 미생물 배지에 플라스미드 DNA를 가지고 있는 대장균을 37도씨에서 12시간 배양한다.

 

2) 대장균 배양액을 E-tube에 옮겨 닮고 12000rpm에서 1분간 원심분리한다.

 

3) 상층액의 배지를 제거하고 100 ㎕의 Solution I을 첨가한 후 vortexer를 이용하여 대장균을 완전히 용해한다.

 

4) 200 ㎕의 Solution II를 첨가한 후 튜브 뒤집기 방법으로 잘 섞어준다.

 

5) 냉장보관된 Solution III를 300 ㎕ 첨가하고 튜브 뒤집기 방법으로 잘 섞어준 후 얼음에 5분간 보관한다.

 

6) 12000rpm에서 3분간 원심분리한 후 상층액을 새로운 E-tube로 옮긴다.

 

7) 상층액 양의 2배에 해당하는 에탄올을 첨가한 후 튜브 뒤집기 방법으로 잘 섞는다.

 

8) 12000rpm에서 3분간 원심분리한 후 상층액을 버린다.

 

9) 1㎖의 70% 에탄올을 첨가하여 튜브 뒤집기 방법으로 세척한 후 다시 1분간 원심분리를 한다.

 

10) 상층액의 에탄올를 완전히 제거하고 50 ㎕의 TE 완충용액에 녹인다.

 

11) 추가적으로 RnaseA를 37도씨에서 10분간 처리하여 RNA를 제거한다.

 

 

 

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