일반생물학실험 | 원형 DNA인 plasmid DNA

 

 

 

Plasmid

세포 내에서 핵이나 염색체와 독립적으로 존재하면서 자율적으로 자가증식해 자손에 전해지는 유전요인이다. 1952년에 미국의 유전학자 J.레더버그가 세균류의 염색체 이외의 유전요인을 플라스미드라고 명명했는데, 최근에는 진핵생물도 포함해 세포질 인자와 같은 뜻으로 흔히 쓰인다. plasmid의 특징은 다음과 같다.

1) 원형의 이중가닥 DNA(circular double-standed DNA)이다

 

2) 세포내에서 염색체 DNA와는 별개로 존재

 

3) 자기 스스로 복제가 가능

 

4) 대부분 세균에 존재하나, 일부 진핵세포에도 존재

 

5) 복제기점(DNA 복제의 시작점으로 숙주 범위 및 plasmid DNA의 copy를 결정)이 존재한다

 

6) 항생제 저항성 유전자(R인자)를 가진다.

 

7) 다중 제한효소 클로닝 부위(Multi cloning site, MCS)가 존재

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 1.5ml E-tube에 pGFPExp 배양액 1.5ml을 옮겨 담는다

 

2) 원심분리 한다.(14000rpm, 3min)

 

3) 상층액을 버리고 pGFPExp 배양액 1.5ml을 다시 한번 넣어주고 원심분리 한다.

 

4) 100㎕ SolⅠ을 첨가한 후 vertexing하여 pellet이 완전히 풀렸느지 확인한다.

 

5) SolⅡ를 제조 후, 200㎕를 첨가한다.

 

6) 5회 정도 inverting 실시 후, ice에 5분간 놔둔다.

 

7) 150㎕ cold SolⅢ를 첨가 후 원심분리 한다.

 

8) 원심분리 후, 상징액을 500㎕를 취해서 새 tude에 옮겨담는다.

 

9) 총량의 2배량(1000㎕)의 차가운 100%-에탄올을 가한 후, ice에 5분간 보관한다.

 

10) 원심분리 한다.(14000rpm, 5min)

 

11) 상징액을 버리고 차가운 70%-에탄올 500㎕을 넣는다.

 

12) 1분간 원심분리하고 70%-에탄올을 완전히 제거후 말린다.

 

13) DW 50㎕넣고 -20℃에 보관한다.

 

 

 

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