일반생물학실험 | 플라스미드의 분리

 

 

 

TIP

 

 

세균 DNA를 구성하고 있는 염색체와 플라스미드의 차이를 알고, 이론을 바탕으로 한 플라스미드 DNA를 분리한다.

 

 

 

플라스미드

세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 환형 DNA분자로서, 고리 모양을 띠고 있으며 세균의 생존에 필수적인 유전자는 아니다. 다른 세균세포에서도, 발현이 가능하기 때문에 유전공학에서는 세균 내 플라스미드를 세포 밖으로 빼내고 제한효소로 끊은 뒤, 필요로 하는 유전자를 삽입하여 이를 다시 세균에 넣어 배양하는 유전자재조합 기술을 사용한다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 8.000rpm에서 3분 동안 원심분리를 통해 세포를 채취한다.

 

2) 박테리아 세포 알갱이들을 Buffer P₁ 250㎕으로 재부유 시킨다.

 

3) Buffer P₂ 250㎕을 첨가한다.

 

4) 튜브를 4～6회 아래위로 뒤집으면서 용액이 맑아질 때 까지 완전히 섞는다.

 

5) Buffer N₃ 350㎕를 넣고 바로 4～6회 아래위로 뒤집어 완전히 섞이게 한다.

 

6) 13.000rpm에서 15분 동안 원심 분리한다.

 

7) 상층액 700㎕을 pipet을 통해 spin column에 옮긴다.

 

8) 30～60초 동안 spin column을 원심 분리한 뒤 밑으로 흘러 내려간 액체는 버린다.

 

9) Buffer PE 750㎕을 spin column에 넣는다.

 

10) 30～60초 동안 spin column을 원심 분리한 뒤 밑으로 흘러 내려간 액체는 버린다.

 

11) 잔여 wach buffer를 없애기 위해 1분 동안 원심분리를 한다.

 

12) spin column을 깨끗한 microtube에 옮긴다.

 

13) Buffer EB 20㎕ 혹은 물을 spin column 가운데에 넣는다.

 

14) 1분 동안 가만히 놔둔다. 1분 동안 원심분리 시킨다.

 

15) 준비된 PUC19, PMKE2를 염색한 후 준비된 Agarose gel에 각각 넣는다. 그리고 100V에서 약 30분간 전기 영동한 뒤 UV로 확인한다.

 

 

 

[일반생물학실험]플라스미드의 분리 레포트