1. 광합성 색소의 종류와 각 색소의 이화학적 특성을 조사하고 이해한다.
2. 종이 크로마토그래피로 식물의 광합성 색소를 분리한다.
종이 크로마토그래피
혼합물을 분리하는 실험 기법이다. 정지상의 한쪽 끝에 시료를 놓고 전개제가 되는 용매의 모세관현상을 이용하여 스며들게 한다. 전개 용매가 스며듬에 따라 혼합물의 각 성분도 이동하는데 이때의 각 성분은 그 이동속도가 다르기 때문에 시간 경과와 더불어 분리된다. 각 물질의 정지상에서의 이동 능력의 차이가 분리의 원동력이다. 본실험에서는 필터페이퍼로 cellulose 종이를 사용하는데 극성용질은 cellulose와 친화도가 높아 잘 타고 올라가지 못하며 비극성 용질은 친화도가 낮아 잘 타고 올라간다.
실험 방법
1. 실험 과정
1) 건조된 시금치 잎을 막자 사발로 곱게 간 후, 아세톤 3㎖를 넣어 색소를 추출한다.
2) 여과지의 밑에서 2㎝ 되는 지점의 중앙에 표시를 하고 밑에서 11㎝ 되는 부분을 미리 접어 놓는다. (여과지는 손으로 만지지 않는다)
3) 50㎖ tube에 전개용액 3㎖을 넣은 후 뚜껑을 닫고 1～2분정도 포화상태로 만들어준다.
4) 점적한 부분은 용매에 닿지 않게 여과지의 끝부분을 용매에 담가주고 여과지가 펴진 상태로 뚜껑을 닫는다.
5) 전개액이 여과지 위에서 1㎝ 정도까지 전개되었을 때 여과지를 꺼내어 색소의 분리를 관찰한다.
6) 여과지를 말린 후 연필로 각 색소가 이동한 지점을 표시하고 각 색소들의 Rf값을 계산한다.
7) 다른 색소가 섞이지 않도록 주의하며 엽록소a와 엽록소b 밴드를 가위로 잘라낸다.
8) 각각 50㎖ tube에 넣은 후 아세톤 2㎖을 넣고 흔들어 색소를 추출한다.
9) 튜브 각각에서 1㎖ 씩을 취해 혼합된 색소액을 추가적으로 만든다.
10) 석영 cuvette으로 UV/VIS spectrophotometer을 사용하여 380～700㎚ 파장에서 스펙트럼을 측정한다. 이론적, 실제 실험에서 최대흡수파장을 알아본다.
[일반생물학실험]광합성 색소 분리
[일반생물학실험]광합성 색소 분리
educhemup.blogspot.com
댓글