생명공학실험 | 세포 배양(cell culture)

 

 

 

TIP

 

 

1. 세포배양을 통하여 세포의 성장 주기와 세포배양법을 익힌다.
2. Hemocytometer를 이용하여 세포 수를 계산할 수 있다.

 

 

 

세포 배양

1. 다세포 생물에서 분리한 세포를 특수한 용기 내에서 성장 및 보존 세포의 세대를 포존시키는 것을 뜻한다. 특수한 용기, 온도, 습도, 영앙소 등의 배양 조건이 필요하다.

 

2. 계대 배양 : 세포증식을 위해 새로운 배양접시에 옮겨 세포의 대를 계속 이어서 배양하는 방법으로, 제한된 배양접시 내에서 세포가 증식을 멈추게 되므로 이것을 막고 세포가 증식할 수 있게끔 새로운 공간을 제공한다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) HBSS를 첨가한다.

 

2) Trypsin-EDTA 2㎖ 첨가후 37℃ 인큐베이터에 2분간 보관한다.

 

3) DMEM(+) 10㎖ 첨가후, 15㎖ tube로 옮긴다. -DMEM(+)속의 Serum(FBS)이 Trypsin-EDT의 활성 억제 및 중단(DMEM(+) : 으드 500㎖ +FBS 50㎖(10%) + Antibiotic-Antimycotic Solution 5㎖(1%))

 

4) 1500rpm으로 3분간 원심분리 한다. (이때 균형유지를 위해 같은 양인 12㎖의 증류수와 함께 원심분리 한다.)

 

5) 거품 제거후 상층액을 제거한다. (pasteur pippet을 tube안으로 넣지 말고 tube를 기울 일 것!)

 

6) DMEM(+) 2㎖첨가후, pippetting으로 pellet을 풀어준다.

7) 0.4 % Trypsin blue 2㎖ + cell sol'n 2㎖로 섞어준 후 세포 수를 계산한다. (hemocytometer, 위상차 현미경 사용)

 

8) 계산한 세포수에 맞게 셀솔루션의 부피를 맞춘다 (실험결과에 부가설명)

 

9) DMEM(+) 2.5㎖첨가후 (기존 0.2㎖에 추가되어 전체 부피가 2.7㎖가 되기위해서 2.5㎖를 첨가)

 

10) culture dish 위에 적당한 양의 새로운 media를 넣어주고 cell name, 날짜, 실험자 이름, 계대 횟수 등을 기록한다.

 

 

 

[생명공학실험]세포 배양(cell culture) 레포트