미생물실험 | 균주 순수 분리 및 배양(Streaking, Spreading, Subculture)

 

 

 

TIP

 

 

세균이 혼합된 시료로부터 단일 콜로니로 순수 분리하는 방법과 계대 배양하는 방법을 통해 single colony를 분리해 본다.

 

 

 

도말

자연 상태에서는 여러 종류의 생물종이 섞여 자라는데, 이러한 경우 한 종의 미생물을 연구하기 힘들다. 따라서 종의 특성을 연구할 때는 단일세포에서 자라난 세포 집단인 순수 배양체(pure culture)가 필요한데, 이를 얻는 방법이 도말이다. 도말에는 도말평판법과 획선평판법이 있는데, 도말평판법은 배지에 골고루 펴발라 도말하는 방법이고, 획선평판법은 한쪽 끝을 멸균하고 그곳의 접종원을 두 번째에서 멸균하는 과정을 반복하는 방법이다.

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실험 방법

1. streak plate method

1) 미리 준비해 둔 LB plate의 온도가 실온이 될 때까지 실험대 위에 꺼낸 뒤, plate 뒷면에 labeling한다.

 

2) loop를 알코올램프로 빨갛게 달구어질 때까지 멸균한 후, 공기 중에서 10～15초간 식힌다.

 

3) 혼합세균 배양 접시에서 loop를 액체배지에 담구고, 평판 배지의 한쪽을 서너 번 streaking.

 

4) plate를 90o정도 돌려 streaking한 끝 부분과 겹치게 다시 streaking한다.

 

5) 4번 과정을 반복한 뒤, 빈 곳에 긋는다.

 

6) 도말이 끝난 평판배지는 뒤집어서 37℃ incubator에 O/N 후, 형성된 colony를 관찰한다.

 

2. spread plate method

1) 미리 준비해 둔 LB plate의 온도가 실온이 될 때까지 실험대 위에 꺼낸 뒤, plate 뒷면에 labeling한다.

 

2) Spreader를 알코올램프에 달구어질 때까지 멸균한 후, 공기 중에서 10～15초간 식힌다.

 

3) 액체배지 내 신체 미생물 배양균을 적정량을 LB plate에 처리한다.

 

4) 멸균된 spreader를 이용해 plate를 돌려가며 얇게 펴 바른다.

 

 

 

[미생물실험]균주 순수 분리 및 배양 레포트