공학생물학실험 | 초파리 침샘염색체 관찰

 

 

 

TIP

 

 

본 실험에서 침샘염색체의 슬라이드 표본을 제작하는 방법을 배우고, 각염색체의 밴드 패턴과 염색체의 끝 모양을 참조하여 각 염색체를 구별하고 퍼프와 같은 특징을 관찰한다.

 

 

 

실험 배경

쌍시목(Diptera)곤충의 유충은 침샘(salivary gland)에서 세포분열이 없이 염색체의 연속적인 분열을 통해 다사 염색체를 형성한다. 초파리의 침샘 세포의 염색체는 다른 세포의 염색체에 비해 약 100배 정도나 크고, 4쌍의 각 염색체에 특징적인 띠(band)가 나타나므로 비교적 구별이 용이하다.

 

침샘세포에서 염색체는 8개로 보이는 것이 아니라 각 상동염색체가 접합하여 마치 하나의 염색체처럼 되어 있어 4쌍이 아니라 4개로 보이며, 또한 4종류의 염색체가 동원체에서 붙어있다. X염색체와 4번째 염색체는 동원체가 염색체의 한쪽 끝에 놓여 있으며, 2번째와 3번째 염색체는 동원체로부터 양쪽으로 염색체팔이 뻗어 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 밥 위로 올라온 큰 초파리의 유충(제3령 유충, wandering third instar larvae)을 꺼내어 petridish등에 올려 놓고 물이나 식염수 약간으로 겉에 묻은 밥이나 이물질 등을 씻어낸다.

 

2) 해부현미경 받침대 위에 슬라이드글라스를 놓고, 그 위에 45% 아세트산 두 방울을 떨어뜨린다.

 

3) 유충을 핀센으로 꺼내어 슬라이드글라스 위의 아세트산으로 옮긴다.

 

4) 꼬리에서 1/3되는 지점을 무딘 핀셋으로 붙들고 날카로운 핀셋으로 머리 쪽을 잡고 빼내면 머리에 소화기가, 다음으로 침샘이 나온다. 얇은 핀셋으로 한 쌍의 주머니 모양의 침샘만을 남기고 다른 부분은 조심스럽게 제거한다.

 

5) 같은 슬라이드 글라스의 다른 부위에 새 45% 아세트산을 한 방울 떨어뜨린다.

 

6) 뽑아낸 침샘을 새로 떨어뜨린 45% 아세트산에 놓고 2-5분 더 고정한다.

 

7) 고정이 끝나면 아세트산의 가장자리 부분에 팁 끝을 대고 침샘이 딸려오지 않도록 조심스럽게 아세트산을 제거한다. (휴지로 조심스럽게 제거해도 된다.)

 

8) 초산오르세인액(lactic-acetic-orcein)을 침샘 위에 한 방울 떨어뜨리고 약 2∼3분 지나서 커버글라스를 덮는다.

 

9) 이 프레파라트를 여과지 사이에 끼우고 엄지손가락으로 커버글라스의 정 중앙을 지그시 눌러서 염색체가 잘 펴지도록 한다. 이 때 커버글라스가 밀리지 않도록 주의한다.

 

10) 옆으로 새어 나온 염색액은 여과지나 화장지로 닦아 낸다.

 

11) 저배율로 검경해서 잘 염색되고 펼쳐져 있는 염색체를 고른다. 고배율로 바꾸어 관찰하고 스케치한다. 400배에서 비교적 잘 보인다.

 

 

 

[공학생물학실험]초파리 침샘염색체 관찰 레포트