일반생물학실험 | 현미경 사용법과 세포 관찰

 

 

 

TIP

 

 

1. 식물세포인 양파 표피세포와 공변세포 그리고 를 관찰하여 세포의 기본적인 형태를 이해함과 더불어 세포염색의 원리를 이해한다.
2. 현미경의 대안, 대물마이크로미터의 사용법을 익히고 마이크로미터를 사용하여 세포의 크기를 측정하는 방법을 숙지한다.

 

 

 

세포 관찰

1. 세포 고정

생물 시료 또는 표본에 인위적인 조작을 하여 그 상태를 가능한 보존하여 변화하지 않도록 유지하는 처리법. 이후 염색을 할 경우엔 염색 결과에 큰 영향을 미치기 때문에 적합한 고정법을 사용하는 것이 중요하다. 주로 탄수화물, 단백질, 지질 등 세포의 기초물질로 구성된 표본을 이용하여 그 조직의 구조를 원래의 생체와 거의 동일하게 보존하는 과정이다.

 

2. 세포의 핵이 염색되는 방법

세포는 핵막이 있어 세포질과 핵이 서로 구분되어 있는데 핵 안에는 염색체가 들어있다. 이 염색체가 염색이 잘되는 이유는 DNA 구조에서 비롯된다. DNA는 5탄당, 염기, 인산기로 이루어져 있는데 이 중 인산기가 음전하를 띄고 있어서 DNA는 전체적으로 음전하를 띄게 된다. 염색체 역시 DNA가 모여 있는 것이기 때문에 음전하를 띄므로 메틸렌블루가 용액 속에서 이온화되고 나면 양이온이 인산기 주위로 끌려가 마치 염색체가 색을 띤 것처럼 보이고 때문에 우리 눈에는 핵이 염색된 것처럼 보이게 된다.

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실험 방법

1. 현미경

1) 대안 마이크로미터를 대안렌즈 부위에 위치시킨다.

 

2) 현미경의 재물대 위에 대물 마이크로미터를 올려놓고 광원의 중앙에 위치시킨다.

 

3) 저배율 대물렌즈를 이용하여 초점을 맞추고 대안 마이크로미터의 눈금과 대물마이크로미터의 눈금이 겹치도록 서서히 현미경의 대안렌즈를 돌린다.

 

4) 고배율 하에서는 대물 마이크로미터에 대물렌즈를 위치시키고 필요하다면 초점을 조정한다.

 

5) 대물, 대안 마이크로미터의 눈금의 한쪽 끝이 겹치도록 재물대를 움직인다. 그리고 대안마이크로 미터의 눈금 수를 계산한다.

 

6) 각각의 배율에서 대물 마이크로미터의 눈금의 크기를 계산한다.

 

7) 주어진 세포를 필요한 배율에서 관찰한다.

 

2. 식물세포

1) 면도날을 사용하여 양파 비늘잎 안쪽에 #자 칼금을 내고 표피세포층을 벗겨낸다. 같은 방법으로 잎의 뒷면에서 표피를 벗겨낸다.

 

2) 슬라이드 글라스 위에 시료를 올리고 증류수를 한방울 떨어뜨린다.

 

3) 여분의 증류수를 여과지로 닦고 70% 알코올 한방울을 떨어뜨린 후 3분 정도 고정시킨다.

 

4) 고정이 끝나면 여과지로 여분의 알코올을 빨아들인다.

 

5) 증류수를 시료 쉬에 충분히 떨어뜨리면서 시료를 세척하고 여분의 증류수는 여과지로 제거한다.

 

6) 메틸렌블루 용액을 시료위에 떨어뜨려서 3분간 염색한다.

 

7) 다시 증류수를 떨어뜨려서 시료를 세척하고 여분의 증류수를 여과지로 빨아들인다.

 

8) 염색이 끝나면 커버글라스를 기포가 생기지 않도록 덮고 저배율 → 고배율로 관찰한다.

 

3. 동물세포

1) 사람의 입 안을 긁어내어 구강세포를 마련한다.

 

2) 커버글라스를 핀셋으로 집어서 슬라이드글라스 위에 세포가 위로 오도록 놓는다.

 

3) 세포 위에 충분한 양의 PBS를 떨어뜨려 시료를 세척하고 여과지를 이용해 여분의 PBS를 빨아들인다.

 

4) 약 3분 후 70% 알코올을 떨어뜨려 3분간 고정한다.

 

5) 고정이 끝나면 여과지로 여분의 알코올을 빨아들이고 커버글라스에 증류수를 떨어뜨려서 3분간 염색한다.

 

6) 다시 커버글라스 한편에 아세토카민 용액을 1～2방울 떨어뜨려서 3분간 염색한다.

 

7) 여분의 염색약을 여과지로 제거하고 현미경으로 저배율 → 고배율까지 관찰한다.

 

 

 

[일반생물학실험]현미경 사용법과 세포 관찰 레포트