분자생물학실험 | 성장곡선 그리기

 

 

 

TIP

 

 

배지 속 세균의 성장을 흡광도를 측정하여 그래프를 작성 및 해석해보자.

 

 

 

생장 곡선

1. lag phase

균을 새로운 배지에 접종하여 배양할 때 배지에 적응하는 시기로서 세포가 새로운 환경에서 증식하는데 필요한 각종 효소 단백질을 생합성하는 시기이다.분열을 위해 세포의 크기가 커지고 호흡활성 도가 높아지는 시기이며, 세포내의 RNA양은 현저하게 증가하고 효소단백질 합성이 왕성해진다.

2. exponential phase

미생물의 발육 과정에서 속도가 최대가 되는 시기. 균의 세대시간이 가장 짧고 대사산물이 원형질의 합성에 가장 잘 이용되는 시기이다.

 

3. stationary phase

세균이나 세포가 증식할 때에 대수증식기를 경과하면 분열, 증식이 정지하여 개체수의 증가가 나타나지 않는 상태를 유지하는 시기이다.

 

4. death phase : 세균이나 세포의 수가 점차 감소하는 시기이다.

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실험 방법

1. 세포 성장 측정하기 준비

1) 준비한 agar streak plate에서 TOP10의 single colony를 loop로 취하여 3㎖와 5㎖ LB가 들어 있는 14㎖ test tube에 접종한다.

2) 1번의 test tube를 37℃에서 overnight shaking incubation(170rpm) 한다.

 

2. 세포 성장 흡광도 측정하기

1) test tube의 bacteria culture의 600nm의 흡광도를 spectrophotometer를 이용하여 측정한다.

 

2) 측정한 흡광도의 값이 0.1이 되도록 LB 30㎖에 희석한다.

 

3) 0시간 흡광도를 측정한 후37도에서 shaking incubation(170rpm) 한다.

 

4) 1시간마다 1㎖의 bacterial culture suspension을 취해 600nm의 흡광도를 측정한다.

 

3. Genmic DNA extraction할 cell 준비

1) 먼저 만들었던 개인의 test tube에서 1㎖ bacterial culture suspension을 취해 1.5㎖ e-tube에 담고, 13000rpm으로 1분간 centrifuge한다.

 

2) 상층액을 제거한 후 위 과정을 포함해 총 3번 centrifuge하는 실험을 반복한다.

 

3) 상층액을 완전히 제거한 후 pellet만 -20도에 보관한다.

 

4. PCR을 위한 primer을 제작해온다.

 

 

 

[분자생물학실험]성장곡선 그리기 레포트