유전학실험 | gDNA extraction from human oral epithelial cells

 

 

 

Genomic DNA

Genomic DNA는 유전체(genome)을 구성하고 있는 긴 DNA 서열으로, 개체가 가지고 있는 유전 정보를 포함하는 모든 DNA를 총칭한다. 좁은 의미로는 플라스미드(plasmid) DNA 와 구분하여 세포 내 염색체(chromosome)를 구성하는 염색체 DNA를 의미하기도 한다. 일반적으로 진핵세포의 genomic DNA는 염색체가 위치하고 있는 세포핵(nucleus) 내부에 위치하며 긴 선형 염기 서열으로 구성되어 있다. Genomic DNA와 플라스미드 DNA는 서로 대비되는 성질을 가진다. 먼저 두 DNA는 서로 다른 구조를 가지는데, 플라스미드 DNA는 원형(circular) DNA 구조를 가지고 genomic DNA는 긴 선형(linear) DNA 구조를 가진다. 플라스미드 DNA는 제한된 수의 유전자 정보만을 포함 할 수 있지만, genomic DNA는 개체의 생명현상에 필요한 모든 유전 정보를 포함 할 수 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 4㎖ PBS를 이용하여 5분 강하게 가글하여 구강세포를 모은다.

 

2)  자신의 구강세포가 들어 있는 타액을 2개의 2㎖ tube에 2㎖씩 담는다.

 

3)  14,000×g 1분 원심분리하여 세포를 모은다.

 

4)  상층액을 파이펫으로 50㎕의 용액만 남게 제거 후, 200µl의 PBS를 넣고 vortexing.

 

5)  Tube spindown 두 개의 2㎖ tube를 하나의 2㎖ tube로 합친다

 

6)  4,000×g , 1분간 원심분리하여 세포를 모은다.

 

7)  상층액을 파이펫으로 제거 후, 600ul의 Nuclei Lysis Solution을 넣고 pellet이 사라질 때까지 vortexing한다.

 

8)  200ul의 Protein Precipitation Solution을 넣고 20초 동안 vortexing한다.

 

9)  얼음에 5분간 둔다.

 

10)  14,000×g, 4분 원심분리 한다.

 

11)  밑에 가라앉은 흰색의 펠렛을 제외한 상층액 700ul를 새로운 1.5㎖ microcentrifuge tube로 옮긴다.

 

12)  600㎕의 isopropanol(실온)을 넣고 inverting 하면서 하얀색 실타래처럼 DNA 가 엉키는 것을 확인한다.

 

13)  얼음에 5분간 둔다

 

14)  14,000×g, 1분 원심분리 한다.

 

15)  Tube 바닥에 DNA가 모인 것을 확인하고 조심스럽게 상층액을 파이펫으로 제거한다.

 

16)  600㎕의 70% ethanol을 넣고 inverting 한다.

 

2.  불순물 제거

1)  14,000×g, 1분 원심분리 한다.

 

2)  Tube 바닥에 DNA가 모인 것을 확인하고 조심스럽게 상층액을 파이펫으로 제거한다.

 

3)  클린벤치 안에서 15분간 에탄올을 증발시킨다.

 

4)  20ul의 Nuclease free water를 넣고 tapping한다.

 

5)  마지막으로 농도를 확인한다.

 

 

 

[유전학실험]gDNA extraction from human oral epithelial cells 레포트