유전학실험 | Restriction enzyme digestion

 

 

 

Treatment of Restriction Enzymes

제한효소를 이용한 절단은 적절한 반응조건하에서 DNA와 효소를 incubation시킴으로써 간단히 수행할 수 있다. 염 농도, pH, 반응온도, DNA 및 효소의 양 등이 효소반응의 변수로 작용한다. 제한효소의 1 Unit는 지정된 buffer와 지정한 온도에서 1시간 동안 λ DNA 1㎍을 완전히 분해하는데 필요한 양을 나타낸다.

1) 멸균한 200㎕ microtube에 다음과 같은 비율로 잘 혼합한다.

 

2)  37℃ incubator에서 약 2시간 정도 반응시킨다.

 

3)  전기영동하여 확인한다.

 

 

실험 방법

1. Protocol

1) 37℃ incubator에서 약 2시간 반응시킨 후 전기영동하여 확인한다.

Plasmid DNA	16㎕
10X R buffer	2㎕
Restriction Enzyme (E.coli)	1㎕
Restriction Enzyme (Hind Ⅲ)	1㎕
Total	20㎕

 

2)  제한효소 100㎕ = 100000㎍

 

3)  plasmid 1㎕에 100～200ng/㎕를 분해할 수 있다. plasmid DNA 16㎕가 들어가기 때문에 Restriction Enzyme은 1㎕씩만 넣어도 된다.

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2. 실험 과정

1)  Put 40㎖ of TAE buffer into the flask.

 

2)  Add 0.8g (2%) of agarose into the flask.

 

3)  Run microwave for 1min to dissolve the agarose.

 

4)  Cool down the agarose solution until 55～65℃.

 

5)  Add 2μl of dyne staining star and mix carefully. (Don’t inhale the steam)

 

6)  Pour solution into the Gel tray.

 

7)  Wait until the solution is solid.

 

8)  Put gel into the machine and run electrophoresis.

 

9)  Check the result using UV lamp.column into collection tube

 

 

 

[유전학실험]Restriction enzyme digestion 레포트