일반생물학실험 | 전기 영동

 

 

실험 배경

전기영동의 원리는 단백질 분자들은 표면의 여러 부위에 양전하 또는 음전하를 띄고 있어, 단백질 혼합액 속에 전극을 설치하고 직류전압을 가하면 음극 또는 양극으로 이동하게 된다. 이처럼 전기장 안에서 하전된 입자가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 전기영동이라고 한다. 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용익의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류등 여러가지 요인에 따라 결정된다. 이러한 성질에 의해 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질 등과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 방법으로 이용된다.

 

전기영동법은 여러 종류가 있는데, 첫 번째로는 이동계면 전기영동법이다. 두 번째는 띠 전기영동법이다. 이 방법은 적은 양의 시료용액을 거름종이, 아세트산 셀룰로오스 정이, 폴리 아크릴아미드 겔, 한천겔, 녹말겔 따위의 지지체에 실은 후 전류를 통하여 주면 시료의 성분들이 점 또는 띠를 이루면서 이동한다. 실험에 따라 지지체를 선택하여아 분리를 효과적으로 할 수 있다. 지지체에는 거름종이, 아세트산, 셀룰로오스, 녹말gel, 한천gel, 아크릴 아미드 겔이 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 1% agarose gel을 만든다.

 

2)  gel tray 300㎖에 1X TEA buffer을 넣고 1% agarose fell을 넣는다.(agarose gell well을 (-)극 쪽에 두도록 한다.)

 

3)  plasmid (1㎕) + TDW(4㎕) 넣어준다.

 

4)  pipeting한sample 6㎕를 agarose gel의well에 넣는다.

 

5)  전기영동 한다.-100V, 25min

 

6)  gel loading이 끝나면 EtBr에 10min둔다.

 

7)  UV를 통해 DNA size를 관찰한다.

 

 

 

[일반생물학실험]전기 영동 레포트