일반생물학실험 | 세포 배양

 

 

 

TIP

 

 

1. 세포의 계대배양법에 대해 알아본다.
2. 사용되는 시약의 용도와 세포를 세는 방법을 익힌다.

 

 

세포배양의 필요조건

1. 수분의 조절

우리가 원하는 유효미생물을 왕성히 번식시키기 위해서는 미생물을 배양시키고자 하는 모든 재료의 수분함량을 70% 필요.

 

2. 공기의 유통

대부분 균과 세포는 호기성으로 공기의 유통이 양호해야 번식이 왕성.

 

3. 온도

대부분의 미생물과 세포는 생육적온 20～40℃이나 유효미생물은 고온균으로 40 ℃ 이상의 고온에서 번식이 활발하고, 유해미생물은 저온균으로 40 ℃ 이하의 저온에서 많이 활동하기 때문에 40 ℃ 이상의 온도를 유지한다.

 

4. 양분

미생물과 세포들은 그들이 필요로 하는 양분을 공급하여야만 활동가능하고 필요 물질의 생성과 노폐물의 분해작용이 가능.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) DMEM(+)을 석션해준다.

 

2)  HBSS 10㎖를 넣어주고 살살 흔들어 cell washing 시킨 후 제거한다.

 

3)  T-EDTA 2㎖를 넣어주고 인큐베이터에 2～3분 보관한다.

 

4)  DMEM(+) 5㎖로 dish를 기울여 쓸어내리면서 바닥에 붙어있는 cell을 다 떨어뜨린다.

 

5)  tube에 옮겨서 1500rpm 원심분리 3분 해준다.

 

6)  원심분리가 끝난 후, 윗부분의 기포를 먼저 제거하고 기울여서 배지를 모두 제거한다.

 

7)  새 DMEM(+) 2㎖을 넣어 바닥에 있는 cell을 풀어준다.

 

8)  96well 칸 하나에 trypan blue 10㎕와 cell용액 10㎕을 넣어 섞어준다.

 

9)  8번 용액 10㎕을 hemocytometer에 넣어주고 cell counting해준다.

 

10)  새 100파이 dish에 새 DMEM(+) 10㎖를 넣어주고 적정량의 cell을 넣어 살살 흔들어준 후, 인큐베이터에서 배양한다.

 

 

 

[일반생물학실험]세포 배양 레포트