분자유전학실험 | CTAB을 이용한 DNA 추출

TIP

 

 

1. genomic DNA 추출 과정을 분자 유전학적으로 접근하여 이론으로 배운 DNA에 대해 직접 실험함으로서 기초적이지만 아주 중요한 이론을 확립한다.
2. DNA를 얻고자 CTAB buffer를 이용하여 개개인 혈액의 정제된 genomic DNA를 추출 할 수 있다.

 

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 시료 100㎕를 2㎖튜브에 넣고 CTAB buffer 800㎕, Proteinase K를 30㎕ 넣고 균질하게 섞이도록 vortex로 혼합, 65℃ 항온수조에서 30~60분간 항온처리하며 3~4회 혼합

2) phenol : chloroform : isoamyl-alcohol (25:24:1) 용액 800㎕를 넣고 실온에서 5분간 흔들어 준 후 10분간 12000rpm으로 원심분리

3) 새로운 1.5㎖ Tube에 상층액을 옮기고 500㎕의 chloroform : isoamyl-alcohol(24:1) 혼합액을 넣은 후 실온에서 10분간 흔들어 준다.

4) 실온에서 10분간 12000rpm으로 원심분리하고 새로운 1.5㎖튜브에 상층액을 옮긴다.

5) 400㎕의 isopropyl alcohol을 넣고 5분간 흔들어 잘 혼합한 후 15분 12000rpm 원심분리 후 pellet이 떨어지지 않게 상층액을 버린다.

6) 99.9% 에탄올 500㎕를 넣고 조심스럽게 vortexing 하고 벽에 붙어있는 DNA pellet을 떼어낸 다음 5분간 12000rpm으로 원심분리 후 상층액을 버리고 남아있는 에탄올을 Pipette으로 pellet을 건드리지 않게 조심하여 제거한다.

7) TE buffer(pH 8.0) 100㎕를 넣어 Pellet을 녹인다.

 

 

 

[분자유전학실험]CTAB을 이용한 DNA 추출 레포트