식품미생물실험 | 주입평판법을 이용한 생균수 측정

 

 

 

TIP

 

 

시료를 배수로 희석하여 희석시료 제조법을 익히고, 주입법을 통한 평판배지제조와 미생물의 정량시험법을 익힌다.

 

 

 

평판배지에 배양을 하는 목적은 시료 속에 존재하는 미생물을 분리하거나 미생물의 수를 측정하기 위한 것이다. 미생물의 수를 세는 경우는 평판배지위에 나타난 콜로니가 단 하나의 세포로부터 생장이 시작되었는지 세포 덩어리에서 생장이 시작되었는지 출처를 분명히 알 수 없기 때문에 미생물의 숫자를 표시할 때는 항상 CFUs로 표시한다.

 

표준평판법을 시행한다면 대상 식품안의 미생물의 수를 알 수 없기 때문에 배양 후에 평판에서 평판당 25～250콜로니 정도로 측정 가능한 범위의 콜로니가 나타나도록 충분한 희석을 한 후 실험을 진행한다. 만약 희석액에서 1㎖ 를 뽑아 평판배지를 만든다면 평판배지의 희석배수는 희석액의 배수와 같지만 희석액을 0.1㎖ 를 뽑아서 만든다면 평판배지의 희석배수는 희석액에서 10배 더 희석되는 것이다. 예를 들어 10^-4 희석액에서 0.1㎖ 를 뽑아 평판배지를 만들면 그 배지는 10^-5배 희석이 된다는 것이다. 이렇게 하면 결과에 혼돈을 줄 수 있으므로 항상 희석배수를 표시해둔다.

 

 

생균수 측정법

생균수 측정법에는 시료를 희석해 1㎖ 에 한 개의 세포가 들어가도록 희석하여 배양하는 최확수측정법, 희석된 시료를 고체배지 표면에 접종하여 배양하는 표면도말법, 이번 실험에서 이용하는 주입평판법, 미생물을 여과지에 걸러내어 그것을 배양하는 박막여과법과 균을 형광염료에 염색시켜 배양후 형광광도계를 사용해 생균성을 측정하는 형광염색법이 있다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 10㎖ 짜리 유리피펫을 알코올 램프에 멸균하여 피펫필러에 끼운 다음 6개의 시험관에 0.1% 펩톤수를 9㎖ 씩 넣는다.

 

2) 1㎖ 짜리 유리피펫을 알코올램프에 멸균하고 피펫필러에 끼워 요구르트 1㎖ 를 1번째 시험관에 넣고 뚜껑을 닫고 볼텍스 믹서를 이용해 잘 섞어서 희석배수 배지를 만든다.

 

3) 2㎖ 짜리 일회용피펫을 피펫필러에 끼우고 요구르트를 넣고 희석시킨 배지에서 1㎖ 를 뽑아 2번째 시험관에 넣어 뚜껑을 닫고 볼텍스 믹서를 이용해 잘 섞어서 희석배수 배지를 만든다.

 

4) 같은 방법으로 희석배수 10^-3, 10^-4, 10^-5 , 10^-6 배지를 만든다.

 

5) 패트리 디쉬에 헷갈리지 않게 각각 농도별로 네임팬으로 희석배수를 적어준다.

 

6) 10^-6 에서 10^-5, 10^-4 농도가 낮은 곳에서 높은 순으로 일회용 피펫을 이용해 1㎖ 씩 뽑아서 패트리 디쉬에 옮긴다. 배지별로 각각 3개의 패트리디쉬에 옮긴다

 

7) 적당히 식은 PCA를 배지가 있는 패트리디쉬에 부어준다.

 

8) PCA와 배지가 잘 섞이게 살살 흔들어준다.

 

9) PCA가 굳으면 패트리디쉬에 수증기가 떨어지지 않게 뒤집어서 37℃배양기에 넣어 배양한다.

 

10) 24, 48시간 후에 한 번씩 관찰한다.

 

 

 

[식품미생물실험] 주입평판법을 이용한 생균수 측정 레포트