식품미생물학실험 | 현미경을 이용한 미생물의 관찰과 총균수 측정

 

 

 

미생물은 세균, 바이러스, 곰팡이, 원생동물, 효모등의 여러 가지 형태로 나누어지며 그들의 크기에 근거하여 현미경으로 관찰할 수 있다. 그러나 바이러스는 광학현미경의 제한된 해상력 때문에 전자 현미경하에서만 관찰 될 수 있다.

 

본 실험에서는 여러 표본을 가지고 다양한 미생물을 광학 현미경을 이용하여 관찰함으로써 미생물의 세계를 이해하고자 한다. 현미경으로 염색되지 않은 살아있는 세균을 관찰한다는 것은 배경과의 대비가 잘 이루어지지 않아 매우 힘들기 때문에 이를 효과적으로 관찰하기 위해서는 충분한 대비를 위한 콘덴서를 통과하는 빛의양을 잘 조절해야 한다. 세균을 배양으로부터 슬라이드로 옮기기 위해서는 무균처리 기법이 요구된다.

 

그리고 미생물의 형태적 특성 관찰과 크기 측정은 미생물을 분류하는데 있어 가장 기본이 되고 중요하다. 본 실험에서는 현미경을 이용하여 미생물의 크기를 측정하는 방법을 익히는데 목적이 있다. 마지막으로 미생물의 증식 과정을 측정하는 방법 중 효모의 균수 계측에 사용하는 토마혈구계를 사용하여 총 균수를 측정해보고자 한다.

 

 

현미경을 이용한 균체 계측법

대안 렌즈의 중간에 장치할 수 있도록 만들어진 원형의 유리판에 5㎜를 50등분하여 눈금 사이가 100㎛가 되게 한 납작한 원형의 대안 마이크로미터(ocular micrometer)와 slide glass의 중앙에 1㎜를 100등분하여 한 눈금사이가 10㎛가 되돌고 만들어진 유리판이 부착되어있는 대물 마이크로미터(objective 또는 stage micrometer)를 사용하여 대안 마이크로미터의 눈금의 길이를 먼저 결정해야 정확하게 미생물 및 물체의 크기를 측정할 수 있다. 접안렌즈 42개의 눈금과 대물렌즈10개의 눈금이 일치해서 접안 마이크로미터 한 눈금이 2.4㎛임을 알 수 있다. 이를 이용하여 균의 크기를 측정 할 수 있다.

 

 

실험 방법

1. 현미경을 이용한 균체 계측법

① 접안렌즈 위의 렌즈를 돌려 빼고, 접안 마이크로미터(ⓐ)를 넣은 후에 원래대로 끼운다.

 

② 검경하여 보면서 ⓐ의 숫자가 초점이 맞았나 확인한다.

 

③ 대물마이크로미터(ⓑ)를 현미경 재물대 위에 놓고, 최저비율로 검경하여 눈금의 위치를 시야의 중앙에 오도록 한다.

 

④ 대물렌즈를 최고배율(×10 또는 ×60)으로 정확히 초점을 맞춘다.

 

⑤ ⓐⓑ가 교차하고 있을 때 접안렌즈를 회전하면서 눈금을 평행으로 한다, ⓐ의 눈금이 ⓑ의 몇 눈금에 해당하는지 읽는다.

 

⑥ ⓑ를 재물대에 빼고 시료균의 프레파라트를 재물대에 놓고 클립으로 누른다.

 

⑦ 검경하여 균의 크기를 ⓐ눈금으로 읽는다.

 

⑧ 읽은 눈금에 ×2.4㎛로 계산하여 균체의 크기를 측정한다.

 

⑨ 여러번(5～10) 반복하여 균체의 크기를 확실히 안다.

 

 

2. 총 균수 측정법

① 효모 현탁액을 제조한다.

 

② Thoma 혈구계의 눈금 위에 피펫을 이용하여 시료액을 취한다.

 

③ cover glass를 덮는다.

 

④ 현미경 재물대 위에 Thoma 혈구계를 올려놓고 1～3분 저배율로 검경한다.

 

⑤ 한 구획에 5～15개 정도가 들어가게 하여 검경한다.

 

⑥ 400배의 고 배율에서 검경하여 측정치의 평균을 구한다.

 

⑦ 1㎖ 당 효모수 = 측정치의 평균 × 10⁶ × 희석배수

 

 

 

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