미생물실험 | Nutrient agar plate 만들기 - Pure culture by the streak plate method

 

 

 

TIP

 

 

agar를 이용해 배지를 만들고, 도말 평판 배양법(streak plate method)으로 4종의 미생물을 도말하여 순수분리 배양한다.

 

 

 

배지의 종류(사용형태에 의한 분류)

1. 액체 배지 : 미생물의 생화학적 연구, 대량 배양 등에 이용

 

2. 고체 배지 : 액체배지에 한천 1.5∼2.0%를 첨가하여 굳힌 것. 순수 분리 배양 등에 이용

(페트리 접시에 평평하게 배양하는 평판배지, 시험관에 비스듬하게 굳힌 사면배지, 시험관의 2/3정도를 평평하게 채운 고층배지 등이 있음)

 

3. 반고체 배지 : 한천의 양을 0.6% 정도로 첨가하여 굳힌 것. 완전히 굳히는 것이 아니라 젤리 형태로 굳힌 것

 

 

균의 접종 방법

1. 분산 도말법(Spread Plate Method)

시료 중에 어떤 종류의 균이 존재하는지 또는 얼마나 많은 양의 균이 존재하는지 알고 싶을 때 이용. 한 페트리 접시 당 100∼300개의 콜로니가 자라도록 시료를 희석하거나 농축하여 접종하는 것이 효율적. 삼각 유리봉을 이용하여 표면에 균을 떨어트리고 유리봉으로 문질러 균을 고루 퍼트려 줌

 

2. 도말 평판법(Streak Plate Method)

균을 순수 분리 배양할 때 또는 고체배지에 있는 균을 새로운 고체 배지에 옮길 때 주로 사용함. 균을 접종하기 위해 각 단계마다 화염 멸균된 백금이를 사용함. 1차 도말한 부분과 120°의 각도를 이루어 2차 도말하고, 2차 도말한 부분과 120°의 각도를 이루어 3차 도말함.

 

3. 주입 평판법(Pour Plate Method)

해수나 깨끗한 담수 등 시료 속에 균이 적어서 접종할 시료의 양이 0.1㎖를 초과할 경우 사용함. 반고체 배지가 들어있는 시험관에 균을 접종한 후 충분히 혼합한 뒤 멸균된 페트리 접시에 부어 골고루 퍼지게 함

 

4. 천자 배양법(Stab-Culture)

미생물의 생리적 특성을 조사할 때 부분적인 혐기조건을 만들어 주는 경우, 생성된 기체의 확산을 막기 위해, 분리된 균의 운동성을 조사할 때 등에 사용됨. 반고체 배지에 수직으로 찔러 접종한 다음 그대로 빼냄

 

5. 사면 배양법(Slant Culture)

균의 생리적, 생화학적 특성을 조사하거나 접종 균으로 계속 사용하기 위하여 균을 보관할 때 사용하는 방법. 사면배지에 지그재그로 균을 도말함

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 100㎖ 측정용 매스실린더에 100㎖의 증류수를 정확히 취한다.

 

2) 측량저울에 종이를 2번 접어서 올리고 0점을 맞춘 후, 약수저를 이용해 NA가루 2.3g을 칭량한다.

 

3) 멸균된 삼각플라스크에 100㎖의 증류수를 넣고 NA가루 2.3을 넣고 은박지 2겹으로 뚜껑을 봉하여 혼합한 다음, magnetic bar를 이용해 핫플레이트의 stir, heat 레버를 모두 5정도에 맞춘 후 가열하면서 혼합시킨다.

 

4) 이 때 agar는 90℃ 정도에서 녹으므로, 용액이 끓어 넘치지 않도록 특히 주의하여 실험하여야 하고, 용액이 투명해져서 뒤에 종이를 대었을 때 글자가 보일 정도가 되면 가열 혼합을 중단한다.

 

5) 멸균확인용 테이프를 은박지 위 플라스크의 목 부분에 붙인 후, 고압멸균기에 넣고 121℃에서 10분간 멸균한다.

 

6) 삼각플라스크의 배지 용액을 60℃ 정도까지 식힌 후 패트리 접시 4개에 각 접시의 절반 정도의 부피가 채워질 때까지 4등분하여 agar 용액(배지)을 20∼25㎖씩 각각 붓고 상온에서 굳힌다.

 

7) 4종의 세균을 페트리 접시 당 하나씩 도말평판 배양법을 이용하여 화염 멸균한 백금이로 120도 각도로 약 3회 정도 돌려가며 도말한다. 각도를 바꿔서 도말할 때마다 알코올램프에서 화염멸균하며 실험을 진행한다.

 

8) 2일 후 세균 배양 상태를 관찰하고 결과를 기록한다.

 

 

 

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