미생물실험 | 세균의 분별 염색법

 

 

 

TIP

 

 

그람염색법의 원리와 방법을 실험을 통해 터득하고, 주어진 박테리아들을 그람양성과 그람음성으로 구분해 본다.

 

 

 

그람 염색법

세포벽을 이루고 있는 성분과 구조적인 차이에 의해 그람양성균과 그람 음성균으로 구별하는 염색법이다. 그람양성세균은 크리스탈 바이올렛 등의 염기성 염료로 염색되어 탈색제 처리 후에도 탈색 되지 않고 보라색을 나타내는 세균이며, 그람음성세균은 탈색제에 의해 크리스탈 바이올렛이 탈색되고 대응 염색제에 의해 염색되어 붉은색을 나타내는 세균이다.

 

 

그람 음성균의 세포벽

펩티도글리칸층이 한 겹으로 매우 얇으며, 이 층 외부에는 인지질 등으로 구성된 외막이 감싸고 있는 형태로 세포벽이 이루어져 있다. 이 때 펩티도글리칸층은 주변세포질공간이라고 불리는 여러 효소와 기질이 존재하는 작은 공간이 생기게 된다. 그람염색을 할 때 알코올에 의해서 외막이 파괴되고 얇은 펩티도글리칸의 구멍으로부터 크리스탈 바이올렛이 빠져나가기 때문에 나중의 대조 염색액인 사프레인으로 염색되어 붉은 색을 나타낸다.

 

 

그람 양성균의 세포벽

원형질의 세포막과 여러 층의 펩티도글리칸으로 이루어진 두꺼운 세포벽을 가지고 있다. 염색 시 굵은 펩티도글리칸 층 안에서 크리스탈 바이올렛과 요오드가 복합체를 형성하여 굵은 입자를 형성한다. 탈색제로 탈색시 이 입자들이 세포벽 바깥으로 바져나오지 못하므로 쉽게 탈색되지 않으며 따라서 염색액 크리스탈 바이올렛이 계속 세균 내에 남아있어 보라색으로 염색된다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 배양액을 10㎕ 떨어뜨린 다음 균체를 고루 분산시켜서 고정시킨다.

 

2) 크리스탈 바이올렛으로 1분간 염색한 후, 물로 씻어낸다 (2초동안).

 

3) 그람 요오드로 1분간 처리 후, 물로 씻어낸다 (2초동안).

 

4) 알코올이 맑아질 때까지 95% 알코올을 한 방울씩 떨어뜨린다(10∼20초)

 

5) 물로 95% 알코올을 씻어낸다.(2초동안)

 

6) 45초 동안 사프라닌으로 염색한 후, 물로 사프라닌을 씻어낸다.

 

7) 커버 글라스를 덮고 관찰한다.

 

 

 

[미생물실험] 세균의 분별 염색법 레포트