면역학실험 | Mouse immune system의 면역반응 test와 해부학적 구조 확인

1주차 실험

1. 실험 목적

1) 마우스 보정방법 숙지한다.

2) Mouse를 구분할 수 있는 numbering 방법 숙지한다.

3) Mouse 채혈 방법 숙지한다.

4) Centrifugation 원리 숙지로 plasma와 serum 차이 이해, 작동 시 주의 숙지한다.

 

2. 실험 요약

Mouse numbering → Blood collection → Centrifugation → serum 획득 → antigen 희석액 제조 → mouse에 주입

 

 

2주차 실험

1. 실험 목적

1) Serum 2차 채취

2) Ag 2차주입(2차면역반응)

3) Cell의 staining을 통해 leukocyte component에 대해 알아본다.

 

2. 실험 방법

슬라이드 글라스를 알코올에 소독한 뒤 blood를 monolayer로 펴준다.

1) 기존 남아있는 정착액을 drain off한다.

2) 준비된 슬라이드 글라스를 Diff quick solution 1 에 5초 간 담가둔다.

3) 기존 남아있는 solution 1을 drain off한다. 

4) 이번에는 Diff quick solution 2에 5초간 담가둔다 

5) 기존 남아있는 solution 2를 drain off한다.

6) 마지막으로 Diff quick solution 3에 5초간 담가둔다.

7) slide를 물로 씻어낸다.

8) 공기중에 건조시킨 뒤에 현미경으로 cell을 관찰한다.

 

 

3주차 실험

1. 실험 목적

1) Mouse의 3차채혈

2) Mouse의 체내 i㎜une organ 위치와 생김새 확인

3) Cell suspension 제조

 

2. 실험 요약

Blood collection → Centrifugation(serum) → Mouse dissection → Cell suspension → Centrifugation

 

 

4주차 실험

1. 실험 방법

1) coating buffer

Bicarbonate/carbonate coating buffer (100㎜)

3.03g sodium carbonte

6.0g sodium bicarbonate

Add 800㎖ d.w. and adjust pH to 9.6

보통 Elisa 용 microtiter plate 제품에 coating buffer 처리가 되어 있다.

다음날 Elisa를 진행하기 위해 미리 well 바닥에 항원을 coating 하였다.

Coat the microtiter plate (IMMUNOBLOT) wells with 100㎕ antigen solution for 18～24 h at 4C or RT.

 

 

 

5주차 실험

1. 실험 목적

ELISA to detect anti-KLH antibody

 

2. 실험 방법

1) Wash 3 times with washing buffer

2) Add 100㎕ 5% skim milk in PBS

3)  Incubate for 20 min RT. (1 h or 20 min)

4) Wash 3 times with washing buffer

5) Add 90㎕ of serum (diluted x10 in 5% skim milk in PBS) (100㎕ à 90㎕)

6) Incubate for 30 min at RT. (1 h à 30 min)

7) Wash 3 times with washing buffer

8) Add 100 ㎕ HRP-labelled secondary Ab

 

 

9) Incubate for 30 min at RT. (1 h or 30 min)

10) Wash 3 times with washing buffer

11) Add 50 ㎕ tetramethyl- benzidine (TMB) substrate.

12) Add 50 ㎕ stop solution 

13) Measure the optical density (OD) at 450 nm.

 

 

 

 

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