분자생물학개론 | 이중 특이성 항체의 제조 방법

 

 

 

TIP

 

 

1. 생체내 접근법
2. 시험관내 접근법
3. 배합 접근법

 

 

 

생체내 접근법

적합한 동물을 항원으로 면혁화시켜 생체내 항체 레퍼토리를 항원에 노출시킨 후, 동물로부터 관심대상의 항체 또는 항체들을 회수하는 것이다. 이 방법은 이중 특이성 항원을 사용한 이중 특이성 항체의 제조 및 관심대상의 두 개의 구조적으로 관련된 분자를 특이적으로 인식하는 항체의 선택에 적용시킬 수 있다. 적합한 환자(포유동물, 상기 포유동물의 유전자이식 된 형태, 녹아웃 형태를 포함)를 이중 특이성 항원의 면역원성 제제로 면역화시킴으로써 제조할 수 있다.

 

적합한 면역원성 제제는 (예를 들면) 화학적 합성, 재조합적으로 발현된 이중 특이성 항원을 함유할 수 있다. 프로인트 완전 또는 불완전 보조제, 또는 유사한 면역자극성 화합물 같은 애주번트를 추가로 포함할 수 있다. 항체를 생성하기 위해서 사용하는 경우, 특히 생체내 면력화에 의해서 항체를 생성하는 경우, (본 발명의) 이중 특이성 항원은 단독으로 사용될 수 있으며, 담체 담백질과의 접합체로서 사용될 수 있다. 이중 특이성 항원이 접합될 수 있는 적합한 담체 단백질의 예는 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH) 및 알부민을 포함한다. 최초로 기술된 하이브리도마를 생산하는 기술 같은 표준 기술로 모노클로날 항체를 제조하는데 사용할 수 있다.

 

불멸 세포주(전형적으로 골수종)를 위와 같이 이중 특이성 면역원으로 면역화시킨 포유동물부터의 임파구(전형적으로 비장세포, 림프절 세포, 말초 혈액 임파구)에 융합시키고, 수득된 하이브리도마 세포의 배양 상등액을 스크리닝하여 관심대상의 두 개의 상이하지만 구조적으로 관련된 분자에 대한 이중 특이성을 갖는 모노클로날 항체 생산하는 하이브리도마를 확인한다. 임파구 및 불멸화된 세포주를 융합시키는데 사용되는 수 많은 잘 공지된 프로토콜 중 하나를 이중 특이성 모노클로날 항체를 생산하는데 적용시킬수 있다.

 

 

시험관내 접근법

이중 특이성 항체는 이중 특이성 항원으로 재조합 조합 면역글로불린 라이브러리(예: 항체 파지 디스플레이 라이브러리)를 스크리닝하여 관심 대상의 두 개의 구조적으로 관련되지만 상이한 분자에 특이적으로 결합하는 면역글로불린 라이브러리 구성원을 분리함으로써 동정하고 분리할 수 있다. 다양한 구체적인 양태에서, 파지 디스플레이 라이브러리는 scFv 라이브러리 또는 Fab 라이브러리이다.

 

항체 또는 항체 일부분은 숙주 세포에서 면역글로불린 경쇄 및 중쇄 유전자의 재조합 발현에 의해서 제조할 수 있다. 항체를 재조합적으로 발현시키기 위해서, 숙주 세포를 항체의 면역글로불린 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 DNA 단편을 갖는 하나 이상의 재조합 발현 백터로 형질감염시켜, 경쇄 및 중쇄가 숙주 세포에서 발현되게 하고, 바람직하게는 숙주 세포를 배양하는 배지내로 분비되게 하며, 배지로부터 항체를 회수할 수 있다.

일단 관심 대상의 항체의 VH 및 VL 절편을 암호화하는 DNA 단편이 수득되면, 이러한 DNA 단편들은 추가로, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작되어 다양한 가변 영역 유전자들이 전체 길이 항체 쇄 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환될 수 있다. 이러한 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편을 항체 불변 영역 또는 유연한 링커 같은 또 다른 단백질을 암호화하는 또 다른 DNA 단편에 작동적으로 결합된다. 본원 내용에서 사용되는 바와 같이, 용어 " 작동적으로 결합된" 은 두 개의 DNA 단편이 결합되어 상기 두 개의 DNA 단편에 의해 암호화되는 아미노산 서열이 프레임내에 유지되는 것을 의미한다.

 

VH 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 암호화하는 또 다른 DNA 분자에 작동적으로 결합시켜 전체 길이 중쇄 유전자로 전환시킬 수 있다.

 

VL 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 또 다른 DNA 분자에 작동적으로 결합시켜 전체 경쇄 유전자(뿐만 아니라 Fab 경쇄 유전자)로 전환시킬 수 있다.

 

 

 

 

분자생물학 : 이중 특이성 항체의 제조 방법 레포트