식품미생물학실험 | 현미경을 이용한 대장균 관찰

 

 

 

TIP

 

 

눈으로 볼 수 없는 미생물 중에 대장균을 현미경을 이용하여 대장균의 형태, 크기, 배열, 움직임, 상태 등을 관찰한다. 표본 제작법과 염색법을 배우고 염색유무에 따른 결과를 보고 차이점을 안다.

 

 

 

단순염색

현미경으로 관찰 할 때 시료에 빛이 투과되어 관찰이 되는데 그 때 염색을 하지 않고 관찰하면 배경과 관찰하는 미생물과 분간이 잘 되지 않아 관찰하기가 쉽지 않다. 그래서 미생물에 염색을 하여 배경과 확실하게 구분해 미생물 관찰을 쉽게 한다.

 

실험에서 하게 되는 단순염색(simple staining)은 가장 많이 하고 쉬운 방법이다. 세균의 핵산과 단백질은 대부분 음전하를 띄기 때문에 음전하와 강하게 결합하는 염기성 염색약을 쓰면 염색약이 세포벽에 들어가 세포의 음전하 부위와 이온결합을 하여 염색이 된다. 실험에서 사용할 crystal violet은 염색되는데 20～60초가 소요된다.

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실험 방법

1. 대장균을 염색하여 관찰

1) 슬라이드 글라스를 병에서 꺼내 둥근 페이퍼에 올려 물기를 제거한다

 

2) 알코올 램프에 라이터로 불을 붙인다.

 

3) 불로 백금이에 있는 보이지 않는 균을 백금이가 붉게 달아오를 때까지 가열해 제거한다.

 

4) 대장균 배지가 담긴 시험관의 입구부분을 마개가 타지 않게 조심하여 불에서 3cm정도 떨어져서 5초간 입구부분의 공기를 데워 마개를 열었을 때 외부 공기가 들어가지 않게 한다.

 

5) 데운 시험관의 마개를 열고 식힌 백금이로 배지를 찍어 슬라이드 글라스 가운데에 긴부분 지름을 1.5～2cm 타원형으로 펴바른다. 2～3번 반복해 배지를 관찰 할수 있을만큼 충분히 펴바른다.

 

6) 배지를 자연건조 시키거나 알코올램프를 이용해 열건조를 시켜 배지를 고정시킨다. 열건조를 할때는 세포가 파괴되지 않게 불에 직접적으로 말리지 않는다

 

7) 마른 배지 위에 crystal violet 염색약을 스포이드를 이용해 한 방울 뿌린다.

 

8) 대장균이 염색되기 위해 60초간 스탑 워치로 재어 기다린다.

 

9) wash bottle로 염색약을 씻어낸다.

 

10) 염색이 된 배지에 덮개가 고정될 만큼의 물기를 제외한 나머지는 말리고 슬라이드 글라스에 덮개를 덮는다

 

11) 관찰할 부분위에 이머젼 오일을 스포이드를 이용해 한방울 올린다.

 

12) 재물대에 슬라이드 글라스를 올리고 고정시킨다.

 

13) 저배율부터 관찰해 100배 대물렌즈로 관찰해 총 1000배 확대하여 관찰한다

 

14) 관찰결과를 기록하고 실험도구들을 정리한다.

 

2. 대장균을 염색하지 않고 관찰

1) 실험 1.의 1)～5)순서와 동일

 

2) 슬라이드 글라스에 덮개를 덮었을 때 고정될 수 있게 완전건조 시키지 않고 덮개를 덮는다

 

3) 관찰할 부분위에 이머전 오일을 스포이드를 이용해 한 방울 올린다.

 

4) 재물대에 슬라이드 글라스를 올리고 고정한 다음 현미경 관찰 순서대로 대장균을 관찰

 

 

 

[식품미생물학실험]현미경을 이용한 대장균 관찰 레포트