구강생화학실험 | 악골과 경조직 칼슘인 적정(Calcium Phosphate Lab) - Determination of Calcium & Inorganic Phosphate content in Blood Plasma and Bone

칼슘과 인은 체내에 가장 많이 존재하는 무기질 중 하나이며 이들은 여러 가지 중요한 역할을 수행한다. 혈중 농도를 일정하게 유지하는 것은 매우 중요한 일 중 하나이며 우리 몸에는 이를 조절하기 위한 여러 기전들이 서로 맞물려 있고, 칼슘과 인이 부족할 경우 이를 보충하는 가장 주된 수단은 뼈로부터의 보충이다. 골의 무기 성분 함량은 약 65%(wt%)이며, 결정학적으로 수산화인회석존재하지 않는 이미지입니다. [Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂] 을 기본으로 하는 구조이며, 인체내 칼슘과 인의 99%와 85%를 함유하고 있다.

 

혈장 칼슘농도는 8.8～10.4㎎%(2.2～2.6㎜)의 범위 내에서 엄격하게 유지된다. 혈장 칼슘은 여러 형태로 존재하는데, 생리학적으로 활성형인 이온형태의 칼슘은 약 5㎎으로 전체 칼슘의 약 50%를 차지하며, 약 4㎎의 칼슘은 혈장단백질인 albumin(3㎎) 또는 globulin(1㎎)과 결합한 형태로 존재하는데 이 칼슘은 확산될 수 없는 칼슘이다. 또한 약 1㎎의 칼슘은 작은 음이온과 복합체를 이루어 존재하는데 이들은 이온형태의 칼슘과 더불어 확산될 수 있는 칼슘이다.

 

정상 성인의 혈장에는 총 12～14㎎의 인이 함유되어 있는데 이중 3-4㎎는 무기인산형태로, 0.5㎎는 phosphate ester 형태로, 5～10㎎는 인지질 형태로 존재한다. 칼슘과 달리 혈장 내에 존재하는 인의 약 85%가 사구체를 통해 확산됨으로써 빠져나갈 수 있다. 혈장 내 무기인산의 대부분은 orthophosphate 형태로 존재하는데, 존재하지 않는 이미지입니다.와 존재하지 않는 이미지입니다.HPO₄^2-와 H₂PO₄^-가 약 4:1의 비율로 존재하여 대부분이 2가 이온 형태로 존재함을 알 수 있다.

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실험 방법

1. Determination of Calcium (Bone : 1/25 희석)

① Introduce into a centrifuge tube 1㎖ of sample, 3㎖ of D.D.W and 1㎖ of 4% a㎜onium oxalate solution.

 

② Mix thoroughly & Stand for 30 min or longer & Mix the contents again.

 

③ Centrifuge for 5 min at 1500 rpm & Pour off the supernatant carefully.

 

④ Wash with 4㎖ of 0.5% a㎜onium hydroxide soln.

 

⑤ Centrifuge for 5 mi at 1500 rpm & Pour off the supernatant carefully.

 

⑥ Add 2㎖ of 1N sulfuric acid & Mix thoroughly.

 

⑦ Place the tube in a boiling water for 1 min.

 

⑧ Titrate with 0.01N KMnO₄ to a definite pink color which persists for 30s at least.

 

2. Determination of inorganic phosphate ( Bone : 1/100 희석, Blood : 1/3 희석 )

① Introduce 1㎖ of sample or blank solution into tubes.

 

② Add 0.5㎖ of 5N sulfuric acid.

 

③ Add 1㎖ of acid ㏖ybdate reagent.

 

④ Mix thoroughly & Add 0.1㎖ reducing agent(ANSA)

 

⑤ Add 2.4 ㎖ of D.D.W. & Mix well.

 

⑥ Read absorbance at 660㎚ after 10 min.

 

 

 

[구강생화학실험]악골과 경조직 칼슘인 적정 레포트