생명과학실험 | DNA extraction

 

 

 

TIP

 

 

병균에 대한 항생제를 만들거나 복제생물을 만들기 위해 자신이 원하는 DNA를 얻는다.

 

 

 

세포막은 인지질 이중층 구조 (미셸 구조)를 가지며, 바깥은 친수성, 안은 소수성 부분으로 나누어져 있다. 그리고 계면활성제 또한 친수성과 소수성으로 나뉘어져 있어서 소수성부분이 기름에 붙어서 분리해주는 것처럼, 세포막과 핵막을 녹여 DNA를 육안으로 관찰하기 위해서는 물과 분리해야하므로 DNA 보다 몰과의 친화력이 강한 에탄올을 사용하여 분해해준다.

 

 

전기영동은 gel 구멍에 염색된 DNA를 넣어 주면, DNA가 (-)전하를 띄는 점을 사용해서 두 전극 사이에 위치시켜 양극으로 움직이게 하는 원리를 이용한다.

728x90

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) Sample에 Seed extraction buffer 400㎛을 넣고 충분히 흔든 뒤, R/T에서 10분 동안 보관한다. (이 과정을 통해 세포막을 열어줌)

 

2) 400㎛ 2x CTAB를 넣고 10번 흔든다.

 

3) Phenol, Chloroform, Isoamylalcohol를 25:24:1로 넣어 600㎛을 만들어 섞어준다.

 

4) 12000rpm으로 10분 centrifuge를 돌린다.(※Rpm : round per minutes)

 

5) 상층액만 새로운 튜브에 옮겨 담아준다.

 

6) Isopropanol 500㎛를 넣고 Inverting gently을 살살 해준다.

 

7) 12000rpm으로 10분 centrifuge를 돌린다.

 

8) 70% EtOH을 12000rpm로 centrifuge 돌린다. (에탄올이 70%를 사용하는 이유는 소독력이 좋고, 30%물을 포함하여, 소금덩어리들을 없애준다)

 

9) dry하여 에탄올을 제거

 

10) TE buffer 50㎛

 

11) RNase 1㎛ (37℃ 30min)

 

 

 

생명과학실험 - DNA extraction 레포트