생화학실험 | ICC(Immunocytochemistry)

 

 

 

TIP

 

 

1. 단백질이 어디에서 발현되는 가의 여부를 알 수있고 또한 그 단백질이 어디로 이동하는 가에 대한 것도 볼 수 있다.
2. 살아있는 세포와 cell line 이 2가지를 이용해서 관찰할 수 있으며 서로 장단점이 있다. 

 

 

 

각 단백질에 달라붙은 first antibody와 또 그 antibody에 붙는 secondary 형광 antibody에 붙이면 일정 파장을 반사하여 색깔이 보이는 것이다.

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실험 결과

실험1. 세포의 모양이 동그란 부분은 왜 그럴까?？

A, B는 세포 분열 중기 과정입니다. A-B 순으로 세포 분열이 일어나는 거죠.　C의 경우 대부분 분열과정에 포함시켜 해석하였는데, 사실은 세포 사멸 중입니다.　세포 사멸을 배웠는지 모르겠지만, 세포 사멸 중 특히 Apoptosis 에서는 Nuclear condenstion이 일어나게 됩니다. 따라서 세포 분열시의 길쭉한 모양이　아닌 동그란 형태로 보이게 됩니다.

 

 

 

실험2. A, B 기능

A의 경우 핵내 단백질이고, B의 경우 세포질내 단백질

 

 

 

실험3. 각각을 염색 했는데, 무엇을 보고자 함일까?

세포 골격입니다. 골격 중 F-actin 을 염색하는 palloidin 이라는 물질에 TexasRed chemical 을 붙인 형광화학물질입니다

 

 

 

실험4. GFP-vector에 Xgene을 cloning하여 GFP-vector와 GFPfusion-X 단백질을 세포에서 발현시키고, 함께 RFP-Ygene을 발현시켰다. 그 결과를 해석해보기.

일단 대조군과 실험군의 차이를 해석해야 하는게 우선입니다. GFP-X 와 RFP-Y 관계는 그 다음에 논해야 합니다. 실험군에 비해 대조군에서는 RFP-Y 단백질이 핵내서 세포질로 퍼져 나와 spotting을 이루는 걸 알 수 있습니다. GFP-X의 경우 특별히 핵으로 이동되진 않지만, 다소 Aggregation이 되는 것을 볼 수 있습니다. 따라서 실험군에 처리된 무언가?는 X.Y 단백질의 세포내 위치 이동에 영향을 준다는 것을 알 수 있습니다. 그리고 X, Y의 관계는 실험군에서 보이듯 X가 발현된 세포에서는 Y가 세포질에 나오지 않았습니다. 따라서 X는 Y가 세포질로 나오는 것을 막는 역할을 한다고 결론내릴 수 있습니다. 추가적으로 X는 Y의 핵내 발현을 감소를 유도하는 것으로 볼 수 있습니다.

 

 

 

 

[생화학실험]ICC(Immunocytochemistry) 레포트