분석화학실험 | Determination of Caffeine in HPLC

 

 

 

TIP

 

 

1. Reverse-phase HPLC를 이용하여 Caffeine의 농도를 결정한다.
2. HPLC(High performance liquid chromatography) 를 이용하여 미지시료에서 caffeine의 농도를 결정하기 위한 실험을 진행한다. 보통 caffeine 분석은 추출 후 분광광도법을 이용하지만 HPLC를 이용하여 혼합물중의 포함되어 있는 caffeine을 보다 손쉽고 빠르게 분석할 수 있다.
3. Retention Time(Tr) 을 사용하여 정성 분석이 가능하고 peak의 높이나 면적을 측정하여 정량분석이 가능하다.

 

 

 

고성능(압력) 액체크로마토그래피(High Performance(Pressrure) Liquid Chromatography)

화합물 중에는 충분히 휘발하지 못하는 물질이나 컬럼을 통과할 수 없는 물질, 그리고 물질이 분리조건하에서 열적으로 불안정하거나 열적 분해를 일으키는 물질이 많기 때문에 기체 크로마토그래피에 의한 분리는 약 20%에 지나지 않는다. 고성능 액체 크로마토그래피는 시료의 휘발성이나 열적 안정성에 제한받지 않고, 거대분자와 이온화학종, 불안정한 천연물질 고분자물질과 다른 큰 분자량을 가지는 다중 작용기의 다양한 화합물을 분리할 수 있다.

 

액체 크로마토그래피에서의 분리는 기체 크로마토그래피 이동상에서는 본질적으로 존재하지 않는 시료분자와 정지상 및 이동상 간에 독특한 상호작용에 의존한다. 액체 크로마토그래피는 정지상을 더욱 다양하게 제공함으로써 이들의 선택적 상호작용에 큰 다양성을 주어 분리 가능성을 더 높여 준 것이다.

 

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 실험 하루 전에 20% Methanol 용액을 흘려준다.

2) Caffeine 양을 정확히 12.5㎎ 달아 5개의 25㎖ 부피플라스크에 각각 묽힌다.

3) 20% Methanol를 만들어서 표선까지 묽힌다.

4) 이 용매를 Mobile phase로 사용한다.

5) pump와 detector를 켜고 pump rate를 3.2㎖/min에 놓고 detector sensitivity를 0.08 AUFS로 맞춘다.

6) recorder를 켜고 slow speed rate로 놓는다.

7) syringe를 가지고 25μL를 주입하고 injection을 잠시 돌린 후 다시 LOAD로 원 위치시키고 syringe를 뺀다.

8) 동시에 recorder에서 injection & Stow를 누른다.

9) caffeine 때문에 record 되어진 peak가 나타난다.

 

 

 

[분석화학실험]Determination of Caffeine in HPLC 레포트