미생물실험 | Cell counts using Hemocytometer

TIP

 

 

Cell을 배양하는 machine (37도, 5% CO₂)에서 꺼낸 sample과 alcohol이 섞인 sample을 비교하여 공기 중에 노출된 sample에서 cell의 생존율을 확인한다.

 

 

 

Hemocytometer를 이용한 Cell counting

동물 세포의 수를 세는 방법으로 접종이나 동결보존 등 일정한 수의 동물 세포를 필요로 할 때 이용합니다. 살아있는 세포와 죽은 세포의 counting을 통해 세포의 생존율을 계산함으로써 실험연구에 사용되는 세포가 잘 유지되고 있는지 확인할 수 있고 이를 통해 세포 생존에 유리하도록 환경을 변화시켜줄 수 있는 것이다.

 

만약 세포의 생존율이 낮음을 알지 못한 채 실험을 했을 경우 산출된 결과가 본래 세포에 의해 나온 결과인지 아니면 죽은 세포에 의해 나타나는 부작용에 의한 결과인지 알 수 없기 때문에 cell counting을 통한 생존율 확인, 세포의 구성요소, 세포활성, 세포분열 등은 실험결과의 신뢰도 측면에서 매우 중요하다고 할 수 있다

 

1. 장점 : 비교적 정확하다, 가격이 저렴하다.

2. 단점 : 부정확 요인이 많다, 불편하고 오래 걸린다, 샘플링 볼륨이 작다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) Sample solution 2개를 hemocytometer에 injection합니다. 그리고 Microscopy를 사용하여 cell을 관찰합니다.

2) Cell에서 trypan blue에 의해 염색된 것은 죽은 cell이고 그렇지 않고 테두리만 염색된 것은 살아있는 cell 이므로 counter를 이용해서 counting합니다.

3) Counting 하는 방법은 아래 사진의 9개 정사각형 영역에서 아래 그림과 같은 5개의 영역 혹은 모서리 4군데의 cell을 counting합니다.

4) Hemocytometer에는 위, 아래 모눈이 2군데 있으므로 총 8 or 10 곳을 counting합니다.

5) 정사각형 눈금의 테두리에 cell이 걸려있는 경우가 있으므로 그림과 같은 ‘ㄱ’자로 세거나 혹은 ‘ㄴ’자로 세는 방법을 사용하여 중복 counting을 예방합니다.

6) 실험에서는 모서리 4곳의 cell을 counting 하였으며, 정사각형의 「 부분만 counting하였습니다.

 

 

7) 양쪽의 cell solution에서 alive, death cell의 개수를 counting한 후에 계산 결과를 dilute 비율 등을 고려하여 실제 부피당 cell의 개수를 추정합니다.

 

 

 

[미생물실험]Cell counts using Hemocytometer 레포트