생화학실험 | 종이 크로마토그래피를 이용한 당류의 분석

 

 

 

TIP

 

 

1. 크로마토그래피를 이용하여 당류를 분별해내고 R_f 값을 계산하여 미지시료에 함유된 시료를 분석한다.
2. 종이 크로마토그래피의 원리를 이해하고 미지시료를 알아내자.

 

 

 

크로마토그래피는 혼합물로부터 그 성분을 순수하게 분리하거나 확인,정량하는 데 매우 편리한 방법이다. 물에는 녹지 않으나 유기용매에 잘 녹는 물질을 흡착제에 대한 흡착성의 차이를 이용하여 분리할 수 있고(흡착 크로마토그래피), 이온화하는 수용성 물질을 분리하는 데에는 이온교환 크로마토그래피가 이용된다. 또한 혼합물의 성분들이 서로 섞이지 않는 두가지 용매에 다 같이 녹지만 이 두 용매에 대한 용해도의 차이가 있을 경우 분배 크로마토그래피에 의해 그 성분을 각각 분리 할 수 있다.

 

종이 크로마토그래피는 원리상으로는 분배 크로마토그래피의 일종으로 거름종이에 흡착된 용매(물)는 정지상 구실을 하고 물과 잘 섞이지 않는 유기용매는 이동상 구실을 한다. 그리고 거름종이는 정지상의 지지체가 된다. 종이 크로마토그래피는 아주 미량의 물질을 정성적으로 확인하는 데 아주 편리한 방법이다.

 

혼합물인 시료의 용액을 거름종이 위에 점적하고 말린 다음 물로 포화된 유기용매 속에 한 쪽 끝을 담가 두면 용매는 모세관 인력으로 인하여 종이 위쪽으로 퍼져 올라가거나(상행전개법), 또는 중력에 의해 아래 방향으로 이동하게 된다(하행전개법) 이 때 시료의 성분들도 용매와 함께 이동하지만 이동하는 동안에 물과 유기용매에 대한 용해도의 차이에 따라 이동속도가 다르다.

 

즉 유기용매에 잘 녹는 성분은 덜 녹는 성분보다 먼 데까지 이동한다. 이리하여 혼합물의 성분은 거름종이 위에서 분리된다. 종이 위에서 분리된 각 성분의 위치는 이들이 무색일 경우 적당한 발색시약을 뿌려서 쉽게 확인할 수 있다. 또 각 성분의 이동거리는 R_f 값으로 나타낸다.

 

R_f = 시료성분의 이동거리/전개용매의 이동거리

 

어떤 한 혼합물의 R_f값은 똑같은 조건하에서는 일정하지만 온도, 용매의 pH, 거름종이 및 용매의 종류에 따라 달라진다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 크로마토그래피의 한쪽 끝에서 3㎝ 되는 곳에 가로선을 그어 출발점을 표시한다.

 

2) 증류수 40㎖ 와 Isopropyl 160㎖을 섞어서 1L 메스실린더 형 용기에 넣어 용기에 용매증기를 포화 시킨다.

 

3) Yellow tip을 이용하여 시료들을 점적시킨다.

 

 

4) 점적시키고 드라이어로 말리기를 약 30회 가량 반복한다.

 

5) 말린 후, 크로마토그래피 용지를 고정시킨다.

 

 

6) 전개 용매에 출발점이 있는 끝을 담고 점적한 부분이 용매에 잠기지 않도록 조심한다.

 

7) 5시간 정도 경과 후 용지를 꺼내어 발색 시약을 뿌린다.

 

8) 오븐 속에 넣고 색이 나타날 때 쯤 꺼낸다. 너무 오래 넣어두면 탈 위험이 있다.

 

9) 용지에 시료들이 분류되면 R_f값을 구한다.

 

 

 

[생화학실험] 종이 크로마토그래피를 이용한 당류의 분석 레포트