미생물실험 | 항생제

 

 

 

디스크 확산법

항균제 감수성 시험에서 가장 많이 사용하는 방법으로 원법은 Kirby-bauer법이나 현재는 소위 변법 Kirby-bauer(National Committee for Clinical Laboratory Standards, NCCLS)이다. 이 방법은 증식이 빠른 포도구균, 장내 그람음성 간균 및 Pseudomonas spp. 등에 대해서만 시험할수 있고, 감수성을 정량적으로 표시할 수 있는 최소발육저지 농도(MIC)는 표시할 수 없고, 감수성, 내성 및 중간으로 나타낸다.

 

그러나 예전에서는 중 등고 감수성이 임균에만 사용하였는데 1944년 이후로 없어졌다. 항균제를 직경 6mm디스크에 스며 들게 하여 건조시킨 것을 감수성 디스크로 사용된다. 삼수성 시험용 배지인 Mueller-Hinton한천의 표면에 적당히 배양과 희석된 시험용 세균을 고르게 접종해서 그 위에 각종약제의 디스크를 올려 놓고 37℃에서 하룻밤 배양한다. 약제는 배지중의 수분에 의하여 녹게 되어, 한천내에 확산한다.

 

그때의 약제농도는 그 디스크에서 멀어지는데 따라 저하한다. 감수성 세균은 디스크에서 어떤 거리를 두고 증식이 저지되므로 디스크를 중심으로 하여 일정의 직경을 가진 발육저지원이 가능하다. 이 때 억제된 부분의 직경을 측정하여 NCCLS판독표를 찾아서 결과를 판정한다. 내성 세균의 증식저지원의 직경이 감수성 세균 보다도 매우 작든가 전혀 없다. 이 방법은 통상 검사로 편리함과 동시에 함 균주에 대해서 한번에 다수의 항균제 감수성 시험을 실시할 수가 있다.

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 먼저 삼각플라스크에 NB1.2g, agar 8g, 물150㎖를 넣고 배지를 만든다.

 

2) 이 배지가 담긴 삼각플라스크의 입구를 막고 autoclave에 넣어 한 시간 가량 멸균해 준다.

 

3) 그 다음 삼각 플라스크에 담긴 배지를 각 16개의 petri dish에 붓는 양을 일정하게 하고, 되도록 얇게 펴 균이 영양분을 골고루 섭취할 수 있도록 해주며, 항생제를 놓았을 때 항생제가 옆으로 퍼질 수 있도록 한다. petri dish에 부은 다음 뚜겅을 살짝 열어 증기가 빠져 나가도록 한다.

 

4) 항생제를 희석하는데 항생제 20㎕와 증류수 200㎕를 섞어 10배 희석한 항생제를 만들고 그 다음 10배 희석한 항생제에서 20㎕를 취하여 또 증류수 200㎕를 섞어 100배 희석시키고, 100배 희석시킨 항생제에서 20㎕를 취하여 또 증류수 200㎕를 섞어 1000배 희석한다.

 

5) 완성된 항생제를 conical tube와 Auto pipette으로 희석 한 후, 20μl씩 취하여 disk에 떨어뜨리고 건조시킨다.

 

6) Auto pipette으로 균을 100㎕씩 취하여 8개의 plate에 도말 한 후, 항생제 disk를 6개씩 조심스럽게 올려놓고 24시간 배양한 후 관찰한다.

 

 

 

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