식품분석학실험 | Physiology & Safety test, Sequencing

 

 

 

TIP

 

 

현미경을 통해 김치 안에 들어있는 균의 morphology를 보아 Lactobacillus가 들어있는지 확인하고, Safety test를 통해 김치의 안전성을 확인하며, 김치 안에 어떠한 균이 있는지 확실하게 보기 위해 plating한 균을 회사로 보내 sequencing 해 본다.

 

 

 

Lactobacillus의 정의 및 특성

Lactobacillus는 유산균 그룹의 속하는 대표적인 균속으로 이 속에 속하는 대부분의 균이 lactose나 sugars를 lactic acid로 바꾸어 에너지를 획득하기 때문에 이러한 이름을 가지게 되었다. Lactobacillus는 Gram positive이며 형태적으로 봤을 때에 대부분은 rod shape을 나타내지만 Coryne형을 나타내기도 한다.

 

대부분 운동성이 없고, catalse negative의 특성을 가지고 있다. 산소가 적은 환경에서 잘 자라며, 산도에 내성을 보이는 것이 많고, 영양 요구성이 복잡하여 당류 외의 많은 아미노산이나 비타민류를 요구한다.

 

균주에 따라 미량의 영양소를 가하지 않으면 못 자라는 것도 존재한다. Lactobacillus 속 안에는 자랄 수 있는 온도 대에 따라, 당을 발효하는 양상에 따라, 균이 생성하는 Lactic acid의 광학이성질체에 따라 나누어지는 60개 이상의 종이 있으며 표준 균종은 L. delbrueckii이다.

 

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실험 방법

Day1 : Sample dilution and plating

1) falcon tube에서 원액 100㎕를 추출하여 serial dilution한다.

 

2) 37℃ 24hr incubation

 

Day2 : Physiology test & colony 따기

1) 어제 serial dilution해서 plating, incubation한 결과를 확인한다.

 

2) Morphology가 다른 colony들을 따서 액체배지(broth)에 접종한다.

 

3) 37℃에서 Overnight Incubation을 한다.

 

Day3

1) Physiology test

① 액체배지로부터 10µl를 slide glass에 옮긴다

② cover glass를 덮은 뒤 현미경을 사용해서 morphology를 확인한다.

③ Lactobacillus의 특유의 Rod shape의 박테리아를 확인한다.

 

2) Safety Test (Biogenic amine test & Hemolysis test)

① Hemolysis Test를 위해서는 "한일코메드 Blood Agar Plate"에 배양한 균을 plating 한다.

② Biogenic amine production test를 위해서는 decarboxylase screening media에 배양한 균을 plating 한다.

 

3) RNA sequencing

① Lactobacillus 전용 Agar plate인 Man-Rogosa Sharpe에 배양한 균을 plating한다.

② Macrogene회사로 16S rRNA sequencing을 의뢰한다.

 

Day4

1) Safety test의 결과를 확인한다.

 

 

 

[식품분석학실험]Physiology & Safety test, Sequencing 레포트