일반생물학실험 | 미생물 분리

 

 

 

TIP

 

 

1. 미생물을 배양하고 분리하는 다양한 방법에 대해 알아볼 수 있다.
2. 순수배양의 의미를 이해하고 방법을 실습한다. 
3. 미생물의 분리방법을 이해한다.
4. culture transfer 방법을 다양한 배지 상에서 익힌다.
5. 미생물 배양용 배지의 종류와 제조방법을 익힌다

 

 

 

미생물은 널리 산재하고 있으므로 순수배양을 하기 위해서는 자연계의 혼합미생물군으로부터 원하는 미생물을 분리하는 것뿐만 아니라 인위적 환경에서 다른 미생물들의 접근을 방지하여 분리한 균주와 그 후손들을 유지, 보존하는 것이 필요하다. 미생물은 증식을 위해 많은 공간을 필요로 하지 않는다. 따라서 인위적 환경은 제한된 시험관, 플라스크 혹은 페트리접시내에서 조성 될 수 있으며, 이러한 3가지 종류의 용기가 미생물배양에 널리 사용된다.

 

배양용기는 처음에 멸균(살아 있는 미생물이 없어야 한다.)되어야 하며, 워하는 종류의 미생물을 접종한 후에도 계속되는 외부의 오염으로부터 보호되어야 한다. 외부로부터의 오염의 주요원천은 공기인데, 공기중에는 항상 떠다니는 미생물들이 많다. 뚜껑이 있는 페트리접시는 공기오염을 방지할 수 있도록 특별히 제작된 것이다. 시험관 및 플라스크의 오염은 적당한 마개로 입구부분을 막음으로써 방지될 수 있다. 이러한 마개로는 현재 금속뚜껑이나 플라스틱의 나사뚜껑이 특히 시험관의 경우 많이 사용되지만 전통적으로는 솜마개가 널리 사용되고 있다.

 

물론 배양용기의 외부표면도 오염되기 쉬우며, 플라스크나 시험관의 내부도 물질을 집어넣거나 제거하기 위해 여는 경우에 오염될 수 있다. 이러한 위험은 마개가 제거된 후 즉시 마개를 다시끼울때 입구부분을 불에 통과시킴으로써 극소화시킬 수 있다. 접종원은 보통 사용 직전에 빨리 불로 멸균한 백금침이나 백금이를 이용하여 접종한다. 액체배양액은 피펫을 이용하여 옮길 수 있다.

 

이렇게 하기 위해서는 피펫의 입구 끝부분을 솜으로 막고, 사용할 때까지 내부와 외부의 오염을 방지하도록 피펫을 종이로 싸거나 유리 또는 금속용기에 넣어서 멸균시켜야 한다. 우연한 오염의 위험은 밀폐된 무균상자나 후드에서 세균을 옮겨줌으로써 더욱 감소시킬 수 있다.

 

균의 종류	배양기	균의 종류	배양기
일반 세균	펩폰 육즙 배양기	산생성균	고지즙, 맥아즙
파라티프스, 티프스	담즙 배양기, 담즙	병원균	혈청
아세톤균	옥수수 배양기	방사선균	차벡크 배양기
효모	고지즙, 맥아즙	사상균	고지즙, 맥아즙

미생물의 종류와 분리용 배지

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실험 방법

1. 미생물의 분리 배양

① 알코올 램프에 백금이를 멸균하여 식혀준다( 배지에서 도말하지 않는 공간을 이용해 식은 것을 확인한다.)

 

② 멸균한 백금이를 접종균을 묻히고 배지의 1/3 가량을 streaking 한다.

 

③ 백금이를 다시 멸균하여 식힌 다음 1차 streaking 부분에서 균을 채취해 2차 streaking 한다.

 

④ 같은 방법으로 3차 streaking 한다.

 

⑤ streaking한 배지를 배양기에서 배양한다.

 

 

2. 분리 배양

① 생리식염수 0.85%를 만든다. 그 후 cap tube에 담는다.

 

② 배지 시약을 만든다.

 

③ MRS Agar와 증류수를 계량해 사면배지를 만든다. cap tube에 담는다.

 

④ 생리식염수와 배지, 사면배지를 멸균한다.(기구도 포함한다.)

 

⑤ 멸균한 생리식염수에 유산균을 배양한 미생물을 백금선에 뭍혀 현탁한다.

 

⑥ 현탁한 생리식염수를 백금이에 뭍혀 배지에 streaking를 한다.

 

⑦ streaking한 배지를 Anaerobic box에 담아 배양한다.

 

⑧ 배양한 배지의 미생물을 백금이에 뭍혀 사면배지에 streaking 한다.

 

⑨ streaking한 배지를 배양기에서 배양한다.

 

 

 

일반생물학실험 : 미생물 분리 레포트