생화학실험 | UV-vis spectrophotometer와 standard curve

 

 

 

TIP

 

 

UV-vis spectrophotometer를 이용해서 시료의 흡광도를 측정하고 그에 따른 Standard curve를 이용하여 미지시료의 농도를 구하기

 

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 1mM의 ρ-nitrophenol을 각각 10, 20, 50, 100, 200μM 농도 1mL를 만든다.

 

	ρ-nitrophenol(㎕)	DW(㎕)
10μM	10	990
20μM	20	980
50μM	50	950
100μM	100	900
200μM	200	800

 

2) 10μM나 20μM의 경우 10㎕나 20㎕의 피펫팅이 부정확할 수 있으므로 100μM용액에서 100㎕를 에펜 튜브에 넣고 DW 900㎕를 첨가하면 10μM의 시약을 얻을 수 있고, 20μM농도의 시약도 이 방법을 사용해서 제조할 수 있다.

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3) 각각 만들어진 용액을 잘 섞고 흡광도를 측정하기 위해서 큐벳에 옮겨 담는다.

 

4) UV-vis spectrophotometer로 증류수의 흡광도를 측정한 후, 각 시료의 흡광도를 측정한다.

 

5) 미지시료의 흡광도를 측정한다.

 

6) 시료의 농도와 흡광도를 바탕으로 standard curve를 작성한 후 일차식을 구한 뒤 미지시료의 흡광도를 대입해서 미지시료 농도를 구한다.

 

 

 

[생화학실험] UV-vis spectrophotometer와 standard curve 레포트