생화학실험 | Protein quantification by DC protein assay

 

 

 

DC (Detergent Compatible) protein assay

본 반응은 Lowry assay와 거의 동일한 원리로 진행된다. 단백질과 alkaline copper tartrate solution 사이의 반응이 일어나고, 이때 생성된 copper-treated protein이 foline 시약에 의해 환원되면서 푸른 색 변화를 보인다. 이는 단백질 농도에 따라 750㎚ 에서 최대 흡광도를 보이면서 단백질 양을 측정할 수 있다.

 

1. 장점 및 단점

본 실험은 계면활성제가 용해된 상태에서 진행하는 비색성 정량법(colorimetric assay)으로, 계면활성제 존재에 따른 실험값의 추가적인 보정이 필요 없다. 또한 15분 내에 최대 색 변화의 90% 이상 진행되므로 시간을 절약할 수 있다. 시약의 추가가 있어도 1시간 내 5% 이내의 색 변화만이 일어난다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) 1.5 ㎖ tube16개를 준비한 후, tube cap에 번호를 1-16까지 기입한다.

 

2) 다음과 같이 tube에 넣는다.

 

tube #		용량
1,2	Standard solution (0.0 ㎎/㎖)	20 ㎕
3,4	Standard solution (0.125 ㎎/㎖)	20 ㎕
5,6	Standard solution (0.25 ㎎/㎖)	20 ㎕
7,8	Standard solution (0.5 ㎎/㎖)	20 ㎕
9,10	Standard solution (1.0 ㎎/㎖)	20 ㎕
11,12	sample 1	20 ㎕
13,14	sample 2	20 ㎕
15,16	sample 3	20 ㎕

 

 

3) DC protein assay kit에서 Solution A를 100 ㎕씩 넣는다. 그리고 잘 mix 한다.

 

4) DC protein assay kit에서 solution B를 800 ㎕씩 넣는다.

 

5) Vortex mix로 mixing한다 (vortexing).

 

6) 15분간 방치한다.

 

7) 750 ㎚에서 흡광도를 측정한다 (750 ㎚가 없는 경우 690 ㎚에서 측정해도 무방하다).

 

8) 각각 흡광도를 기록한다.

 

9) Protein 농도를 계산한다. ; Excel file를 이용하면 편리하다.

 

 

 

[생화학실험] Protein quantification by DC protein assay 레포트