Chemistry/분석화학

분석화학실험 | 비타민 C의 정량 - Dinitrophenyl Hydrazine 비색법

곰뚱 2020. 7. 5.

분석화학실험  |  비타민 C의 정량 - Dinitrophenyl Hydrazine 비색법

 

 

 

TIP
 
 

1. Hydrazine 비색법의 원리를 이해하여 본다.
2. 시료(레몬)의 총 비타민C 함량을 구할 수 있다.

 

 

 

Hydrazine 비색법

이 방법은 매우 미량의 vitamin C도 정확하게 정량할 수 있다는 것이 장점이다. 산화형 비타민 C (Dehydroascorbic acid)2,4-dinitrophenyl hydrazine(이하 DNP)과 작용하여 정량적으로 적색의 osazone을 생성하므로 이의 85% H2SO4 용액의 정색을 비색 측정하여 산화형 비타민 C를 정량할 수 있다.

 

, 시료 중의 ascorbic acid를 산화하여 dehydroascorbic acid로 만들고, 시료 중에 처음부터 함유되어 있는 산화형 비타민 C와 함께 정량하여 총 비타민 C의 양으로 한다. 처음부터 함유되어있는 산화형 비타민 C 만을 별도로 정량하면 양자의 차로부터 ascorbic acid의 산화에는 앞서 기술한 indophenol이 흔히 사용되며, 반대로 ascorbic acid의 산화방지에는 thiourea 또는 염화 제 1주석(SnCl2)이 사용된다. Hydrazine법은 indophenol법보다 정밀도가 높고 비타민 C함량이 낮을 경우에도 정확히 측정된다.

 

분석화학실험  |  비타민 C의 정량 - Dinitrophenyl Hydrazine 비색법 - undefined - Hydrazine 비색법

 

 

실험 방법

1. 실험 과정

1) 시험관 14개를 준비한 다음 label을 달아 구분한다. 비타민C, 1,2,3,4,5%, blank를 각각 2개씩(공시험용, 측정용) 14개에 label을 달아준다.

2) Hydrazine 비색법의 측정 조사순서 일람표를 보고 실험을 해나간다.

 

 

총 비타민 C

공 시험용

총 비타민 C

측정용

측정용 AA표준용액

공 시험용

측정용

AA표준용액용

시료용액()

측정용 AA표준용액()

2

-

2

-

-

2

-

2

DCP 용액()

thiourea-HPO3 용액()

DNP 용액()

1

2

-

1

2

1

1

2

-

1

2

1

항온수조(50)중에서 70분간 방치

85% H2SO4()

DNP 용액()

흡광도 측정

5

1

5

-

5

1

5

-

실온(빙수 중)에서 30분간 방치 후 파장 520에서 흡광도를 측정

측 정 값

E0

E

Eo'

E’

모든 시약을 가하고 난 뒤에는 vortex mixer로 섞어 준다.

 

3) 공 시험용과 측정용의 차이는 DNP용액을 넣는 순서의 차이다. 그러므로 두 방법이 섞이지 않도록 구별을 잘하고 공 시험용은 항온수조에 넣을 때 측정용보다 양이 작아야한다. (DNP 용액을 아직 넣지 않았기 때문에 1차이가 나야한다.)

 

4) 항온수조에 넣는 시간은 수조의 온도에 따라 조절될 수 있다. 37에서는 3시간 방치, 50에서는 70분은 방치하게 된다.

 

5) 85% H2SO4을 가할 때는 위험하므로 주의해야한다. 공 시험용에만 DNP 용액을 넣은 뒤 모든 시험관의 수위가 같은지 본다. 만약 시험관에 들은 용액의 양에 차이가 생긴 다면 그것은 중간에 실험을 빼먹었다는 뜻이다. 확인이 끝났으면 찬물이 담긴 수조에 시험관을 넣어 식히도록 한다.

 

6) 손 보호를 위해 수술용 장갑을 끼고 셀에 흡광도를 측정할 용액을 약 3/2정도 담아 차례로 상자에 넣는다. 이렇게 하면 흡광도 측정을 보다 쉽고 빠르게 진행할 수 있게 된다.

 

7) spectrophotometer에 용액이 담긴 셀을 넣고 흡광도를 측정한다.

 

8) 총 비타민 C의 함량을 구해본다.

 

 

 

 

[분석화학실험]비타민 C의 정량 - Hydrazine 비색법 레포트

1. 실험 목적 가. Hydrazine 비색법의 원리를 이해하여 본다. 나. 시료(레몬)의 총 비타민C 함량을 구할 수 있다. 2. 실험 이론 및 원리 가. 실험 이론 1) Vitamin C 식품 중의 vitamin C 에는 환원형인 L-ascorbi...

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