Biology/일반 | 세포 생물학

일반생물학실험 | Paper Chromatography에 의한 물질 분리

곰뚱 2021. 6. 5.

 

 

 

TIP
 
 

페이퍼크로마토그래피를 이용하여 여러 가지 성분을 가지고있는 물질을 가지고 있는 성분을 대략적으로 분석 하는 것이다.

 

 

 

크로마토그래피

1) 크로마토그래피 원리

크로마토그래피는 혼합물이 분리되는 것은 각 성분들의 이동상에 대한 용해성의 차이와 고정상에 대한 흡착성의 차이 때문에 고정상에 흡착되어 있는 물질을 이동상이 녹여 내면 이동상을 따라 성분 물질들이 움직이게 된다.

 

2) 크로마토그래피 이용

여러종류의 아미노산을 검출하는데 이용하고 도핑테스트 그리고 각종 비타민, 금속의이온, 당분 지방등을 확인하거나 분리하는 데 이용되고 있다.

 

3) 크로마토그래피의 종류

종이크로마토그래피 : 종이에 검은 수성 사인펜으로 점을 찍은 후 수직으로 세워놓고 아래 부분이 물에 잠기도록하면 물이 종이를 따라 올라가면서 사인펜 속의 색소가 분리된다. 이때 종이처럼 고정되어 있는 물질을 정지상이라 하며, 물과 같이 위로 이동하는 물질을 이동상이라 한다. 색소들은 저마다 물을 따라 올라가는 속도가 달라 분리가 가능하다.

 

 

 

관크로마토그래피

관 크로마토그래피의 경우, 관 속에 정지상으로 쓰일 물질을 채우고, 그 위에 시료혼합액과 함께 이동상을 흘려주면 정지상 사이사이로 시료혼합액과 이동상이 내려가게 된다. 이때도 역시 잘 흘러내려가는 시료가 있고 그렇지 못한 시료도 있어 통과 속도에 차이가 생긴다. 따라서 같은 길이의 관을 통과하는데 걸리는 시간이 시료마다 다르고, 이 시간 차이를 이용해 시료를 분리할 수 있다.

 

예를 들어 가장 빠른 수중 생물 중 하나인 새치와 사람이 바다에서 해류를 따라 200m 거리를 헤엄친다고 생각하자. 새치는 200m를 금방 도착할 것이고 사람은 그보다 늦게 도착할 것이다. 이때, 바닷물을 이동상, 바위나 해초 등 바다 속에 박혀 방해를 주는 것들을 정지상이라 할 수 있다. 새치는 이동 속도가 빠른 시료이고 사람은 이동 속도가 느린 시료라 할 수 있다.

 

728x90

 

 

실험 방법

1. 광합성 색소의 분리

1) 시금치 잎 0.1g과 아세톤 0.5㎖를 균질기에 넣고 파쇄한다.

 

2) 균질기의 뚜껑을 닫고 탁상용 원심분리기를 이용하여 원심분리하여(10.000rpm에서 1분간) 상등액을 취한 추 2㎖ 튜브에 옮긴다.

 

3) 균질기에 남은 침전물에 아세톤 0.5㎖를 넣고 다시 파쇄하고, 원심분리한 후 상등액을 기존 상증액과 합친다(광합성 색소 추출, 균질기 사용 후 깨끗이 세척하여 제자리에 놓을 것).

 

4) 여과지(2㎝ × 15 ㎝)의 하단 약 1.5㎝ 되는 부분에 연필로 가로선을 그어서 출발지점을 표시한다 (여과지에서 용액이 전개될 부분을 손으로 만지지 않도록 주의할 것)

 

5) 이쑤시개를 사용하여 광합성 색소 추출액을 지름 3㎜ 이하의 크기로 출발선 위에 15~20회 반복하여 찍는다(점적 중간에 건조기로 말려줄 것). 점적된 언의 크기가 작을수록 해상력이 높다.

 

6) 건조된 여과지를 클립으로 걸어서 끝이 1㎝ 정도 잠기도록 전개용액에 담근다(광합성 색소 추출액이 전개용액에 달지 않도록 주의 할 것).

 

7) 60분 후 여과지를 꺼내 올라간 전개용액의 위치를 연필로 표시해두고 건조기로 말린다.

 

8) 분리된 각 광합성 색소의 반점 중앙까지의 거리를 측정하여 Rf값으로 광합성 색소의 종류를 알아본다.

 

2. 아미노산의 분리

1) 여과지(3.5㎝ × 15㎝)의 하단 약 1.5㎝ 디는 부분에 연필로 가로선을 그어서 출발지점을 표시한다(여과지에서 용액이 전개될 부분을 손으로 만지지 않ㄷ도록 주의할 것)

 

2) 아미노산 표준 대조액과 혼합액을 각각 다른 이쑤시개를 사용하여 지름 3㎜ 이하의 크기로 출발선 위에 10회 반복하여 찍는다(점적 중간에 건조기로 말려줄 것). 점적된 원의 크기가 작을수록 해상력이 높다(이때 두 용액의 간격은 2㎝를 유지할 것)

 

3) 여과지를 잘 말린 다음 반점의 중앙을 연필로 표시하고, 반점의 하단에 용액 이름을 적는다.

 

4) 건조된 여과지를 클립으로 걸어서 끝이 1㎝ 정도 잠기도록 전개용액에 담근다(대조액과 혼합액이 전개용액에 닿지 않도록 주의 할 것).

 

5) 50분 후 여과지를 꺼내 연필로 올라간 전개용액의 위치를 표시해두고 건조기로 말린다.

 

6) 건조된 여과지 전체에 0.1% 닌히드린 용액을 분무하고 10분간 건조기로 말린다(닌히드린용액은 독성물질이므로 일회용 장갑을 착용하고, 직접적으로 가스를 들여 마시지 않도록 주의하며 분무할것)

 

7) 분리된 각 아미노산의 반점 중앙까지의 거리를 측정하여 Rf값을 구한다.

 

8) 여과지에 나타난 반점의 색과 Rf값으로 혼합액에 들어있는 아미노산의 종류를 알아본다.

 

 

 

 

[일반생물학실험]Paper Chromatography에 의한 물질 분리 레포트

1. 실험 목적 1.1. 페이퍼크로마토그래피를 이용하여 여러 가지 성분을 가지고있는 물질을 가지고 있는 성분을 대략적으로 분석 하는 것이다. 2. 실험 이론 및 원리 2.1. 크로마토그래피 2.1.1. 크로

www.happycampus.com

 

그리드형

댓글