일반화학실험 | 얇은 막 크로마토그래피

 

 

 

TIP

 

 

시료와 용매의 분배차이를 이용하여 크로마토그래피의 원리를 이해하고 혼합물을 분리할 수 있다.

 

 

 

얇은 막 크로마토그래피

얇은 막 크로마토그래피는 분배 및 흡착 크로마토그래피가 모두 가능하나 보통 흡착에 의한 것을 많이 사용한다. 흡착 TLC의 고정상은 고체흡착제이다. 이 크로마토그래피에 있어서는 먼저 실리카겔 혹은 알루미나와 같은 고체흡착제를 얇게 바른 유리관을 마련해야 한다. 분석 또는 정제하려는 물질의 용액을 만들고 이 용액을 모세관으로 흡착제를 바른 유리관의 하단 근처에 묻혀 반점을 만든다. 이 관을 전개실의 전개 용매에 담그는데 용매의 액면이 반점밑에 오도록 한다. 그러면 용매는 모세관현상에 의하여 관을 따라 위로 올라가게 되고 시료중의 성분물질들은 서로 다른 속도로 이동하게 된다. 이와 같이 이동상이 고정상을 지나 이동하는 것을 전개라 한다.

 

용매에 대한 용해도가 큰 물질일수록 또 흡착제에 대한 결합력이 약한 물질일수록 빠른 속도로 이동할 것이다. 전개가 끝난 다음에 판 위에는 성분 물질이 분리되어 생긴 몇개의 반점이 용매의 액면에 수직한 일직선상에 늘어서게 된다. 성분 물질이 색깔이 없는 화합물일 경우에는 적당한 발색제를 써서 반점을 나타나게 할 수 있다. 성분 물질이 이동한 거리를 용매가 이동한 거리로 나눈 값을 R_f 값이라 부른다.

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실험 방법

1. 시료제조

1) MR, MO, BTB를 각각 소량(1～2㎎)취해 에탄올과 물의 1:1 혼합물 3㎖에 용해시킨다.

 

2) Aspirin을 0.1M 농도로 아세톤에 용해시킨다.

 

2. 전개용액 제조

1) 전개용액 A (n-buthanol : Ethanol : NH₄OH = 3 : 1 : 1)

 

2) 전개용액 B (n-buthanol : Acetic acid : 증류수 = 4 : 1 : 2)

 

3. 실험 과정

1) TLC 판 위의 1㎝ 정도 위치에 연필로 선을 긋고 점적할 곳을 표시한 수 모세관을 이용하여 시료를 각각 1회씩 점적한다.(MR, MO, BTB, Aspirin)

① 볼펜, 유성펜을 사용하면 안됨

② 모세관은 아세톤으로 2-3회 세척 후 재사용함.

 

2) 전개용매 A를 TLC챔버에 넣고 약 5㎖ 정도가 되도록 넣은 후 싳판을 홈에 맞게 넣은 후 5～10분간 전개시킨다.

① spot이 전개용매에 담궈져 분석물질이 용매에 빠져나가지 않도록 한다.

② 전개시 챔버 뚜껑을 덮어 전개용액이 증발되어 조성이 변하는 것을 방지한다.

③ TLC판의 실리카겔은 인체에 해로우므로 핀셋을 이용한다.

 

3) 전개용매가 TLC판의 위쪽(0.5㎝남기고)에 도달했을 경우 TLC판을 꺼내어 용액이 올라간 높이를 연필로 표시하고 건조시킨다.

 

4) 각 물질의 R_f값을 계산한다.

① aspirin은 UV detector(254㎚)로 감지하고 신체에 노출되지 않도록 주의한다.

 

5) 전개용액 B로 1) ～ 3) 실험을 반복한다.

 

6) 미지시료 2개를 점적하여 각각의 전개용액에서 위와 같은 방법으로 전개시킨 후 R_f값을 확인 후 미지시료의 성분을 확인한다.

 

 

 

[일반화학실험]얇은 막 크로마토그래피 레포트