일반생물학실험 | Plasmid DNA - 전기영동

 

 

 

TIP

 

 

1. 제한효소를 통해 절단된 plasmid DNA를 전기영동을 통해 확인한다.
2. 전기영동을 함으로써 그 원리와 방법을 익히도록 한다.

 

 

 

DNA 전기영동

DNA를 크기에 따라 분리하기 위해 DNA 전기영동을 하는 것이다. DNA는 기본골격에 있는 인산기 때문에 전기영동에 사용되는 완충용액 속에서 (-)전하를 띠고 있어서 두 전극 사이에 위치해 있을 때 50V～100V 정도의 전류를 흘려주게 되면 (+)극 쪽으로 움직이게 된다. 이 때 gel은 그물모양으로 엮여있기 때문에 DNA 분자가 gel을 통과하는 속도는 분자량이 커질수록 늦어지며 젤의 밀도가 클수록 늦어진다. 또한 DNA의 분자량이 같더라도 구조에 따라서 움직이는 속도가 다르다. 예를 들면 supercoil된 DNA는 선형 DNA 보다 빠르게 움직인다고 알려져 있다.

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실험 방법

1. 실험 과정

1) agarose를 TAE buffer에 녹여 끓인다.(1%로 만들었으므로 그에 따라 만든다.)

 

2)  agarose가 녹으면 상온에서 gel tray에 부어서 상온에서 천천히 식혀 굳힌다.(완전히 녹도록 하되 너무 오래 끓이면 농도가 변할 수 있으므로 조심한다.)

 

3)  digested DNA mixture 15㎕와 6X sample buffer 3㎕를 섞는다.

 

4)  untreated DNA 1㎕와 증류수 9㎕, 6X sample buffer 2㎕를 섞는다.

 

5)  굳은 gel을 전기영동 장치에 넣는다.

 

6)  well에 순서대로 만든 시료와 DNA marker를 넣는다.

 

7)  25～30분간 100V의 전류를 흘려준다.

 

8)  EtBr : TAE buffer 1:10000 mixture에 gel을 넣고, 15분간 염색한다.

 

9)  UV를 쬐어서 원하는 size의 DNA를 사진 찍어 눈으로 확인한다.

 

 

 

[일반생물학실험]Plasmid DNA - 전기영동 레포트