면역학실험 | 면역 시냅스 형성 분석 - Analysis of the Immunological Synapse Formation

TIP

 

 

면역 시냅스 형성 과정을 이해하고 이를 관찰한다.

 

 

 

Immunological Synapse

우리 몸에 Antigen이 들어오면 Antigen Presenting Cell(macrophage, B-cell, Dendrictic cell)이 이를 receptor 혹은 non-specific한 방법으로 인식하여 자기 세포 안으로 끌어들이고 난 후 Antigen을 조각조각 잘게 쪼갠다. 그런 뒤 MHC class molecule을 통해 조각 난 Antigen을 T-cell에게 전달한다.

 

T-cell 표면에 있는 T-cell receptor가 <MHC molecule + Antigen조각>을 인식해서 결합하면 T-cell이 Activation되고 이들이 증식하게 된다. 이에 따라 체내에 들어온 Antigen을 방어할 수 있게 된다. 이 때 APC와 T-cell은 매우 tight하게 넓게 결합하고 있다. 이렇게 해서 세포와 세포 사이에 tight한 접합을 하고 있는데 이를 ‘Immunological Synapse’ 혹은 ‘Immune Synapse’라 한다.

 

 

Cell Adhesion Molecules(CAMs)

APC와 T-cell receptor 결합 이외에도 세포와 세포 사이에는 다른 종류의 상당히 많은 숫자의 단백질의 접합 또한 동시에 수반된다. 이러한 세포와 세포 사이의 접합을 도와주는 단백질들을 Cell Adhesion Molecules 이라 한다. 우리가 관찰하고자 하는 Immune cells 사이에 관여하는 CAMs에는 Selectin family, Mucin-like family, Integrin family, Ig family (ICAMs), 총 4가지 family가 있다.

 

 

실험 방법

First Step : T cell-APC(Raji B cell) conjugation

① Raji B cells were incubated in RPMI with 5×10⁶ cells/㎖ for 1 hour

② Jurkat T cells : add CFSE solution 37℃ for 10min

③ Jurkat T cells and Ragi B cells are mixed at a 1:1 ratio and density of 106 cells/㎖

④ Slides are fixed in 3.7% formaldehyde for 20min at room temperature.

⑤ Permeablize cells in 0.1% Trinton X-100 for 15min at room temperature.

 

Second Step : Immunofluorescence staining

① Blocking in 2% BSA/PBS for 1hour at room temperature.

② Cells are incubated with phallodine-alexa 568 (1:100) at 37℃ for 30min.

③ Wash slide in 0.05% tween-20/PBS (5분씩 3번)

④ Air dry

⑤ Mounting

 

 

 

[면역학실험]면역 시냅스 형성 분석 레포트