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  보건환경미생물학실험 | Heterologous expression of the transformed gene TIP 형질전환된 미생물에서 plasmid에 의해 이형발현시켜, 생성된 단백질로 형질전환이 잘 되었는지 확인하고, 어떤 과정에서 잘못되었는지 점검하고자 한다. IPTG induction isopropyl-1-thio-β-D-galactopyranoside의 약칭으로, lac operon 효소합성을 유도하는 강력한 유발물질이다. 비분해 비대사성이 유도물질이라 미생물이 합성을 계속 유도시킨다. lacZ gene에서 β-galactosidase 만들 때 필요하다. allolactose와 유사한 젖당유사체로서, inhibitor(repressor)와 결합하여, E. coli의 RNApolymerase가 lac promoter를 인식하도록 하여, T7 polymerase gene을 전사하도록 하는 역할을 담당한다.. Engineering/환경 | 토양 | 폐기물처리 공학 2022. 10. 10.

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  일반생물학실험 | Expression of recombinant α-synuclein gene 실험 방법 1. 실험 과정 1) BL21의 transformation을 시행한 후 배양시킨 배지로부터 E.coli colony를 따서 LB+Amp liquid Media 25㎖에 접종하여 suspension culture를 했다. overnight culture를 한 후 LB+Amp liquid media 325㎖에 부었다. OD를 측정하기 위해서는 처음에 박테리아가 없는 것을 0으로 잡고 우리가 접종하여 키우던 것을 큐벳에 넣고 흡광도를 측정하면 된다. 2) 처음에 OD가 0.1이었고 2시간 후 0.2였다. 37℃에서 좀 더 culture하여 1시간 후 OD가 0.6가 되었다. 이 때 1mM의 IPTG 350㎕(1mM)를 넣은 후 15℃에서 8시간 동안 induction을 시킨다. 이 과정에서 IPTG.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 10. 7.

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  생명과학실험 | 단백질 발현과 정제 TIP 1. 단백질 발현의 목적 : 특정 유전자를 통해 얻고자 하는 단백질을 대량 생산할 수 있다. 2. 단백질 정제의 목적 : 단백질을 순도 높게 분리 및 정제함으로써 수많은 단백질 중 원하는 단백질만을 얻기 위함이다. 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입하여 숙주 세포에 도 입하면 마치 숙주 세포의 유전자처럼 발현되는 기법이다. 알로락토오스와 유사한 IPTG를 이용해 Lac repressor와 결합하게 함으로써 lac operator와의 결합을 방해하 여 전사가 일어나도록 한다. 유전자 과발현 시 단백질의 정제가 쉬워지고 정제의 수율이 올라간다. 실험 방법 1. 단백질 발현 1) 알코올램프를 켜고 피펫을 사용해 kanamycin(항생제)을 일부 덜어 SB배양액에 넣고.. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 8. 18.