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  생명과학실험 | 단백질 발현과 정제 TIP 1. 단백질 발현의 목적 : 특정 유전자를 통해 얻고자 하는 단백질을 대량 생산할 수 있다. 2. 단백질 정제의 목적 : 단백질을 순도 높게 분리 및 정제함으로써 수많은 단백질 중 원하는 단백질만을 얻기 위함이다. 단백질 발현 재조합 단백질 기법은 외부 유전자를 플라스미드 벡터에 삽입하여 숙주 세포에 도 입하면 마치 숙주 세포의 유전자처럼 발현되는 기법이다. 알로락토오스와 유사한 IPTG를 이용해 Lac repressor와 결합하게 함으로써 lac operator와의 결합을 방해하 여 전사가 일어나도록 한다. 유전자 과발현 시 단백질의 정제가 쉬워지고 정제의 수율이 올라간다. 실험 방법 1. 단백질 발현 1) 알코올램프를 켜고 피펫을 사용해 kanamycin(항생제)을 일부 덜어 SB배양액에 넣고.. Biology/생명 과학 | 공학 2021. 8. 18.

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  생화학실험 | His–Tag 단백질의 정제 - Purification of His-tagged proteins TIP 1. 단백질을 정제하는 목적 1) 가능한 최고의 회수율 2) 최고의 생물학적 활성 유지 3) 최고의 순도 His-tag 단백질 / Ni-NTA 현재 재조합 단백질을 정제하는데 가장 많이 사용되는 방법이다. 다시말하면, 단백질을 구성하는 아미노산 중 히스티딘이 금속 이온과의 배위 결합에 강하게 관여한다는 연구 결과가 있다. 6개(혹은8개)의 His을 연속으로 달아놓으면 Ni등의 금속이온과 배위결합을 생성한다. Ni이 레진에 결합되어 있으면 His을 달아 Ni결합 레진에 단백질이 달라붙는데(Ni고정-NTA사용)이런 성질을 이용해 단백질을 정제한다. 따라서 유전자 공학적으로 단백질의 말단에 다수의 히스티딘을 첨가하면 단백질의 금속 이온 친 화성이 현저히 증가하여 쉽게 정제가 가능하다. 히스태그를 갖는 .. Biology/생화학 2020. 7. 5.