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  일반생물학실험 | 단백질 추출 및 정량 TIP  Cell에서 단백질을 추출하고 Bradford assay를 통해 이를 정량한다.   Coomassie Brilliant Blue G-250Bradford mathod에서 사용되는 염료이다. 산성 조건 하에서 갈색인 반면, 단백질과 결합하면 전체적으로 음전하를 띠며 푸른색으로 변하게 된다. 또한 이러한 성질 때문에 Polyacrylamide gel electrophoresis를 사용하여 단백질 또는 단백질 복합체를 분리하는데 사용할 수 있다. 단백질 농도가 많을수록 더욱 진한 파란색을 띤다. Coomassie Blue가 단백질에게 전자를 주어 단백질의 중성 상태를 무너뜨리면 단백질의 소수성 부위가 노출되는데, 노출된 부분에 Coomassie Blue가 비공유 결합을 이룬다. 또한 양전하를 띠는 아.. Biology/일반 | 세포 생물학 2022. 5. 9.

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  일반생물학실험 | 단백질 정량 분석 단백질 정량 단백질 정량이란 시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정이다. 단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 보통 peptide나 단백질을 6N HCl 용액이 들어있는 시험관에서 공기를 제거하고 밀봉한 후 100°에서 8-24시간 동안 가열하여 가수분해 시킨다. 이러한 가열조건에서는 모든 peptide bond가 파괴되고 glutamine과 asparagine의 경우에는 side chain의 amide bond도 파괴되게 된다. 또한 tryptophan과 serine, threonine 등의 아미노산은 파괴되기 때문에 이러한 단백질을 정량하기 위해서는 특별히 주의를 기울여야 한다. 산성 용액에서 파괴되는 아미노산을 분석하기 위해서는 별도로 단백.. Biology/일반 | 세포 생물학 2021. 9. 8.